Isolement et caractérisation de transcrits ovariens exprimés au cours du développement fœtal chez la brebis

فرنسي. La production d’ovocytes fécondables dépend de la réalisation de multiples étapes parmi lesquelles deux semblent particulièrement importantes dans l’obtention de gamètes femelles: l’entrée en méiose des cellules germinales et la formation des follicules. Chez les mammifères, les gènes impliqués dans le contrôle de ces deux étapes sont peu connus. L’objectif de notre étude a été d’identifier chez la brebis les gènes impliqués dans ces deux étapes qui se déroulent pendant la période foetale. Pour cela nous avons utilisé la technique SSH qui nous a permis d’obtenir deux banques d’ADNc soustraites. L’une contenant des transcrits exprimés préférentiellement pendant la méiose et l’autre contenant des transcrits exprimés préférentiellement pendant la formation des follicules. Parmi ces transcrits, 6080 ont été séquencés et regroupés sous forme de 2101 assemblages (contigs). L’annotation de ces 2101 assemblages montre que 99% d’entre eux possèdent une homologie de séquences avec les bases de données humaines, bovines et ovines. Les 1% restant sont considérés comme des séquences inconnues car ils ne présentent pas d’homologie avec les bases de données interrogées. Dans nos banques nous avons isolé et étudié une dizaine de transcrits dont l’expression n’avait pas été étudiée dans l’ovaire. Parmi ces transcrits, Topaz1 (Testis Ovary-specific PAZ domain gene1) est exprimé uniquement dans les gonades mâles et femelles chez l’ovin et la souris. Chez les femelles de ces deux espèces, ce transcrit est exprimé dans l’ovaire foetal avec une expression plus importante pendant la période qui coïncide avec la méiose des cellules germinales. Nous avons recherché la totalité de la séquence nucléique du transcrit Topaz1 ovin in silico et par la technique 5’RACE. Les séquences orthologues du gène Topaz1 ont été retrouvées dans le génome de plusieurs mammifères (souris, chien, vache, homme) ainsi qu’une partie de la séquence chez le poulet. La séquence nucléique de Topaz1 est très conservée entre ces différentes espèces. Au niveau protéique un domaine nommé PAZ a été identifié. Ce domaine est trouvé dans les protéines Argonaute et PIWI qui ont un rôle dans la différenciation des cellules germinales. Cette étude nous a permis d’une part d’isoler et de caractériser de nouveaux gènes impliqués dans la différenciation ovarienne précoce et d’autre part de constituer une collection de transcrits dédiée à la différenciation de l’ovaire chez la brebis qui servira à évaluer et comparer le transcriptome d’ovaires dans différentes conditions physiologiques.