Identificación de estadios larvarios de Taenia solium y T. asiatica en muestras de tejidos de cerdos (Sus scrofa ssp domestica) mediante LAMP

El complejo teniasis/cisticercosis es una enfermedad parasitaria zoonótica de distribución mundial, causada por el cestodo Taenia solium, T. saginata y T. asiatica. Las especies que afectan al cerdo y al humano son T. solium y T. asiatica. El ciclo natural del parásito incluye al cerdo como hospedero intermediario y al humano como hospedero definitivo y/o en algunos casos como hospedador intermediario por contaminación fecal-oral. El Ecuador se considera un país endémico a teniasis humana e hiper-endémico a la Neurocisticercosis. Mientras que, en cerdos, los estudios y las cifras de prevalencia no informan sobre la evolución del número de casos a lo largo del tiempo y faltan estimaciones de la tasa de incidencia de cisticercosis, provocando grandes pérdidas económicas y siendo un grave problema de salud. El objetivo del presente estudio fue identificar estadios larvarios de T. solium y T. asiatica en muestras de tejidos de cerdos (Sus scrofa ssp. domestica) mediante la técnica biomolecular de LAMP; para generar una primera información sobre su uso y viabilidad. Se colectaron un total de 76 muestras de quistes con lesiones en diferentes tejidos del cerdo sugerentes a estadios larvarios de Taenia spp. con una mayor ubicación en hígado (52), seguido de músculo masetero (5,) espaldilla (4), lengua (4), bíceps (3), corazón (2), diafragma (2), muslo (2), músculo del cuello (1) e intestino (1). La viabilidad de las muestras (control del proceso) se determinó mediante un ensayo LAMP para Sus scrofa spp domestica con un set de cebadores para el gen COXII, mientras que para identificar las muestras de T. solium y T. asiática se utilizó un ensayo LAMP con un set de cebadores para los genes COXI. Como resultados del total de muestras colectadas, el 36,84% fueron válidas al control del proceso, mientras que para el ensayo LAMP para T. solium se obtuvo un 15,79% de muestras positivas; para finalmente tener un total de 10,53% muestras positivas y también válidas al control del proceso, por el contrario, para T. asiática todas las muestras resultaron negativas. LAMP es capaz de detectar estadios larvarios positivos a T. solium y válidos al control del proceso, como el caso de las muestras de intestino y varios de tejido hepático, los cuales fácilmente podían ser confundidos con E. granulosus o T. hydatigena. Sin embargo, es evidente que varias de las muestras que coinciden con lesiones características a estadios larvarios de tenia, resultaron negativas al ensayo para T. solium y no válidas al control del proceso. Siendo necesario adaptar los ensayos para los reactivos utilizados, mejorar los protocolos en el método de extracción o incluso tener en cuenta la cantidad de tejido porcino que cubre a los quistes y buscar mayor evidencia que pueda sugerir si la viabilidad de estos puede afectar o no en la forma en cómo se logra preservar el ADN.

The taeniasis/cysticercosis complex is a worldwide zoonotic parasitic disease caused by the tapeworm Taenia solium, T. saginata and T. asiatica. The species that affect pigs and humans are T. solium and T. asiatica. The natural cycle of the parasite includes the pig as an intermediate host and the human as the final host and/or in some cases as an intermediate host due to fecal-oral contamination. Ecuador is considered an endemic country to human taeniasis and hyper-endemic to Neurocysticercosis. While in pigs, studies and prevalence figures do not report on the evolution of the number of cases over time and estimates of the incidence rate of cysticercosis are lacking, causing great economic losses and being a serious health problem. The objective of the present study was to identify larval stages of T. solium and T. asiatica in tissue samples from pigs (Sus scrofa ssp. domestica) using the LAMP biomolecular technique; to generate a first information on its use and viability. A total of 76 samples of cysts with lesions were collected in different tissues of the pig suspected of larval stages of Taenia spp. with a greater location in the liver (52), followed by masseter muscle (5,) shoulder butt (4), tongue (4), biceps (3), heart (2), diaphragm (2), thigh (2), neck muscle (1) and intestine (1). The viability of the samples (process control) was determined by a LAMP assay for Sus scrofa spp. domestica with a set of primers for the COXII gene, while a LAMP assay was used to identify the samples of T. solium and T. asiatica with a set of primers for the COXI genes. As a result, it was observed that, of the total samples collected, 36.84% were valid for process control, while for the LAMP test for T. solium, 15.79% of positive samples were obtained; to finally have a total of 10.53% positive samples and also valid for process control, on the contrary, for T. asiatica all the samples were negative. The LAMP technique is capable of detecting larval stages positive to T. solium and valid for the control of the process, such as the case of intestine and various liver tissue samples, which could easily be confused with E. granulosus or T. hydatigena. However, it is evident that several of the samples that coincide with lesions characteristic of cysticercosis, were negative in the test for T. solium and not valid in the control of the process. Being necessary to adapt the tests for the reactives used, improve the protocols in the extraction method or even take into account the amount of porcine tissue that covers the cysts and seek more evidence that may suggest whether or not the viability of these may affect the way in which DNA is preserved.

Médico Veterinario Zootecnista

Cuenca