Perfil eletroforético das proteínas do plasma seminal e sua relação com a congelabilidade do sêmen bovino | Proteins electrophoretical profile of seminal plasma and their relationship with bovine semen freezability

The objective of this study was to evaluate the protein profile of bovine seminal plasma using two dimensional polyacrilamide gel electrophoresis (2D PAGE) and to find out if any of these proteins was correlated with semen freezability. Seminal plasma was collected from 16 bulls of high and low semen freezability from an artificial insemination center. Twelve protein spots were identified from the 2 D gel (15%), six of which were present in all samples, but only the spots 3 (15 16 kDa), 5 (16 17 kDa) and 7 (10 12 kDa) did not show any variation between bulls. On the seminal plasma samples collected from bulls with high semen freezability, four protei ns showed superior optical densities (P<0,005), the spots 3 (15 16 kDa, pI 4.7 5.2), 7 (11 12 kDa, pI 4.8 4.9), 11 (13 14 kDa, pI 6.0 6,5) and 23 (20 22 kDa, pI 4.8 5.2). On the other hand, the spot 25 (25 26 kDa, pI 6.0 6.5) showed superior optical densit ies (P<0.005) on seminal plasma samples from bulls with low semen freezability . The N terminal amino acid sequence of the spot 7 was identical to the amino terminus of acidic seminal fluid protein (aSFP). The results of the protein 23 sequence after tryps in digestion showed identity to bovine clusterin. Only the spots present on all the samples were analyzed in the 2 D gel (8%). Three protein spots were detected with molecular range and pI from 190 195 kDa, pI 6.5 7.5; 66 kDa, pI 5.4 and 55 kDa, pI 4.5. We stern blot analyses confirmed that the 66 and 55 kDa spots were albumin and osteopontin, respectively. Those two proteins showed superior optical densities (P  0.005) on seminal plasma samples from bulls with high semen freezability. The spot of 190 195 kDa did not show any variation between seminal plasma samples from low and high freezability bulls. The data found in this study suggest that the protein profile differs between low and high bull semen freezability and that clusterin, albumin, osteopotin, and proteins 3 and 7 can be used as a semen freezability markers and protein 25 would be related with low semen freezability.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul, FAPERGS, Brasil.

O objetivo do presente estudo foi relacionar o perfil eletroforético das proteínas do plasma seminal bovino com a congelabilidade do sêmen. F oi utilizado o plasma seminal de 16 reprodutores bovinos de alta e baixa congelabilidade de uma central de inseminação artificial. Foi utilizada a eletroforese bidimensional em géis de poliacrilamida a 15% e 8%, respectivamente, para a análise das proteína s de baixo e alto peso molecular. Foram encontradas 12 bandas protéicas nas amostras de plasma seminal analisadas nos géis SDS PAGE a 15%, corados com azul de Comassie. Apenas 6 das 12 bandas foram detectadas em todos os ejaculados estudados, sendo que som ente as bandas protéicas 3 (15 16 kDa), 5 (16 17 kDa) e 7 (10 12 kDa) não apresentaram variação significativa entre as amostras de plasma seminal dos reprodutores. Das proteínas focalizadas neste estudo, 4 apresentaram se quantitativamente superiores (P  0, 005) nas amostras dos reprodutores pertencentes ao grupo de alta congelabilidade, as bandas 3 (15 16 kDa), 7 (11 12 kDa), 11 (13 14 kDa,) e 23 (20 22 kDa), enquanto que a banda protéica 25 (25 26 kDa) mostrou se significativamente superior (P  0,005) nos re produtores de baixa congelabilidade do sêmen. A seqüência do N terminal da banda protéica 7 mostrou se idêntica à proteína ácida do fluido seminal bovino (aSFP). O resultado do seqüenciamento, após digestão por tripsina, da proteína 23 mostrou similaridade estrutural com a clusterina bovina. Nos géis SDS PAGE a 8%, foram analisadas somente as bandas protéicas identificadas em 100% das amostras de plasma seminal. Foram quantificadas três bandas protéicas que apresentaram diferentes pesos moleculares e pontos isoelétricos: 190 195 kDa, pI 6,5 7,5; 66 kDa, pI 5,4 e 55 kDa, pI 4,5. A banda de 66 kDa foi identificada através de imunodetecção como sendo a albumina e a banda protéica de 55 kDa foi identificada como osteopontina. A albumina e a osteopon tina apresentaram densidade óptica significativamente superior (P  0,005) nas amostras dos reprodutores de alta congelabilidade do sêmen. As evidências encontradas neste estudo mostram que existem diferenças no perfil protéico dos reprodutores com alta e ba ixa congelabilidade do sêmen, sugerindo as proteínas ácida do fluido seminal bovino, clusterina, osteopontina, albumina e as bandas protéicas 3 e 11 como possíveis marcadores da alta congelabilidade do sêmen e a proteína 25 como indicativo da baixa congela bilidade do sêmen.