Qualidade microbiológicas de ostras (Crassostrea rhizophorae) e água de cultivo e suscetibilidade de Escherichia coli a óleo essencial de Lippia origanoides

The intake of marine bivalve molluscs, raw or lightly cooked, is a common practice in all the coastal regions of Brazil. The consumption of these foods is associated with the emergence of Food Transmitted Diseases. Among the clams, oysters stand-by feature bioaccumulate particles present in the environment, leading to contamination by pathogenic microorganisms such as Escherichia coli. Thus, the aim of this study was to evaluate the microbiological quality of Crassostrea rhizophorae and cultivation water of Reserve Marine Extractive Bay Iguape – Bahia, phenotypically characterize E. coli isolated from these samples and check the OE antimicrobial action Lippia origanoides front isolated strains of oysters and standard strains of EHEC pathotypes samples ATCC (ATCC 43895), EPEC (ATCC CD O111ab), ETEC (ATCC 11229). Four samples were taken at three different points in the period January to April 2015. For analysis of the water used is the number of technical More Likely - NMP / 100 mL with series of five tubes in three dilutions. The determination of population of total coliforms (TC) and E. coli in Oysters was performed by rapid method of count Petrifilm ™ EC plates (3M Company). The essential oil of Lippia origanoides was obtained by hydrodistillation. To evaluate the antimicrobial activity was conducted microdilution test broth proposed by the CLSI (2003) with adaptations, to obtain determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of the essential oil studied. Water samples had a mean microbial count of 1.30 log NMP/100 mL for CT and 2.45 log NMP/100 mL, for thermotolerant coliforms, ranging from 0.83 to 2.08 log NMP/100 mL and from 0.66 to 6.80 log NMP/100 mL, respectively. The Oyster microbiological analysis showed CT count values from 0.95 to 4.76 log UFC/g and E. coli from 0.95 to 6.80 log UFC/g. Genotypic characterization of isolates identify the virulence gene stx/EHEC in 36.6 % (11/30) of the samples. None of the samples showed the virulence gene bfpA/ EPEC. The chemical composition analysis has revealed as major compound carvacrol (48%) followed by p-cymene (6.27%) and thymol (4.10%).The findings showed that the essential oil of Lippia origanoides has inhibitory action across all studied strains. The MIC for the isolated strains of oysters (Crassostrea rhizophorae) was 1.09 mg.mL-1, which is considered minimal bacteriostatic concentration. CBM to isolate the pickup point D was 1.09 mg.mL-1 and E. coli isolated from the growing points A and C were 4.37 mg.mL-1. The standard strains showed MIC and MBC of 1.09 mg.mL-1. The minimum bactericidal concentration was 1.09 to ETEC mg.mL-1 and EHEC and EPEC were 0.54 mg.mL-1. Microbiological results although they are in accordance with the standards established by international law, virulence gene identified in part of the samples suggests careful about consumption of oysters grown in this location. It is recommended the production of controlled oyster pollution, highlighting the continuous monitoring of the area and the quality of the production process of oysters. It is evident that the essential oil has been studied biotechnological potential for the development of antimicrobial to be used in the control of pathogenic bacteria.

A ingestão de moluscos bivalves marinhos, crus ou levemente cozidos, é uma prática comum em todas as regiões litorâneas do Brasil. O consumo desses alimentos pode está associado a ocorrência de Doenças de Transmissão Alimentar. Dentre os moluscos, destacam-se as ostras, pela característica de bioacumular partículas presente no ambiente, propiciando a contaminação por microrganismos patógenos, como Escherichia coli. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi avaliar a qualidade microbiológica de ostras Crassostrea rhizophorae e água de cultivo da Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape – Bahia, caracterizar genotípicamente E.coli isoladas dessas amostras e verificar a ação antimicrobiana do Óleo Essencial de Lippia origanoides frente as cepas isoladas de amostras de ostras e cepas padrão ATCC dos patotipos EHEC (ATCC 43895), EPEC (CD O111ab), ETEC (ATCC 11229). Foram realizadas quatro coletas em três pontos distintos, no período de janeiro a abril de 2015. Para análise da água utilizou-se da técnica do Número Mais Provável - NMP/100 mL com série de cinco tubos em três diluições. A determinação da população de Coliformes totais (CT) e E. coli em ostras foi realizada por meio de método rápido de contagem em placas Petrifilm™ EC (3M Company). O óleo essencial de Lippia origanoides foi obtido através de hidrodestilação. Para avaliação da atividade antimicrobiana foi realizado teste de microdiluição em caldo proposto pelo CLSI (2003) com adaptações, para obtenção da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) do óleo essencial estudado. As amostras de água apresentaram contagem microbiana média de 1,30 log NMP/100 mL para CT e 2,45 log NMP/100 mL, para coliformes termotolerante, variando entre de 0,83 a 2,08 log NMP/100 mL e 0,66 a 6,80 log NMP/100 mL, respectivamente. A análise microbiológica de ostra evidenciou valores contagem de CT de 0,95 a 4,76 log UFC/g e E. coli 0,95 a 6,80 log UFC/g. A caracterização genotípica dos isolados identificou o gene de virulência stx/EHEC em 36,6 % (11/30) das amostras analisadas. Nenhuma das amostras estudadas apresentou o gene de virulência bfpA/EPEC. Para determinação da atividade antimicrobiana do OE de Lippia origanoides, foi realizada a análise da composição química que revelou ter como composto majoritário o carvacrol (48%) seguido do p-cimeno (6,27 %) e timol (4,10%). Os achados demonstraram que o óleo essencial de Lippia origanoides possui ação inibitória frente a todas as cepas estudadas. A CIM para as cepas isoladas de ostras (Crassostrea rhizophorae) foi de 1,09 mg.mL-1, sendo esta concentração considerada bacteriostática mínima. A CBM para o isolado do ponto de coleta D foi 1,09 mg.mL-1 e E. coli isoladas dos pontos de cultivo A e C foram 4,37 mg.mL-1. As cepas padrão apresentaram CIM e CBM de 1,09 mg.mL-1. A concentração bactericida mínima para ETEC foi 1,09 mg.mL-1 e para EHEC, e EPEC foram de 0,54 mg.mL-1. Os resultados microbiológicos apesar de estarem de acordo com os padrões estabelecidos pela legislação internacional, a identificação do gene de virulência nas amostras analisadas sugere cuidado quanto ao consumo das ostras cultivadas neste local. Recomenda-se a produção de ostras controlada de poluição, destacando o monitoramento contínuo dessa área e da qualidade do processo produtivo de ostras. Evidencia-se que o óleo essencial estudado apresenta potencial biotecnológico para o desenvolvimento de antimicrobianos para ser usado no controle de bactérias patogênicas.