Eficácia dos diluidores do kit SBS CryosSystem e do BotuCrio na criopreservação de sémen em garanhões Puro Sangue Lusitano

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária

Foi também avaliado o efeito da adição de cushion fluid previamente à centrifugação. Houve uma redução significativa (p<0,0001) da motilidade média do sémen fresco (71%) para o sémen congelado (36%), e dos parâmetros de velocidade VCL, VSL e VAP entre estes dois períodos (p<0,0001). Observou-se um efeito significativo (p<0,0001) dos fatores “garanhão” e “diluidor” sobre as variáveis estudadas, não havendo uma interação significativa entre estes dois fatores. O BotuCrio foi o diluidor que apresentou uma motilidade média após descongelação mais elevada (48%) e o Azul foi o que apresentou uma menor motilidade média (21%). Quanto à vitalidade, o diluidor Vermelho obteve a maior média (41%) e o diluidor Laranja a média mais baixa (34%). Em relação ao HOST, o diluidor Violeta apresentou a maior média de caudas enroladas (47%), enquanto o BotuCrio apresentou a menor média (35%). A motilidade apresentou uma correlação forte com o VCL (0,82) e VAP (0,77), uma correlação moderada com o VSL (0,56) e vitalidade (0,63), e não apresentou correlação com o HOST (-0,01). A adição de cushion fluid apresentou um efeito significativo sobre as variáveis motilidade (p<0,005), vitalidade (p<0,0005) e HOST (p<0,05). Observou-se a existência de variabilidade entre garanhões nos diversos parâmetros avaliados, mais evidenciada na motilidade, e dentro do mesmo garanhão, entre diferentes ejaculados, sendo a amplitude desta variabilidade diferente consoante o garanhão avaliado. Assim, neste trabalho não foi possível determinar a existência de um diluidor específico para cada garanhão que permitisse a otimização do processo de criopreservação.

ABSTRACT - The optimization of semen cryopreservation protocols is essential to improve its viability and, consequently, fertility rates. The present master's dissertation consisted in the study of the effectiveness of the freezing extenders that are part of the SBSCryoSystem Kit – Red, Green, Orange, Purple and Blue - and BotuCrio in six purebred Alter Real Lusitano stallions. The sample used was of 6 stallions and 5-6 collections were performed per stallion in a total of 204 straws. The main objectives of the present study were to evaluate the effect of the different extenders on several seminal evaluation parameters as well and the existence of inter and intraindividual variability. Seminal parameters evaluated included a subjective analysis of motility, an objective analysis of sperm kinetics that was performed using the CASA system, the assessment of vitality and the evaluation of membrane integrity and functionality by performing a hypoosmotic test (HOST). The effect of adding cushion fluid prior to centrifugation was also evaluated. There was a significant reduction (p<0,0001) in the mean motility of frozen semen (36%) when compared to fresh semen (71%), associated with a significant decrease (p<0,0001) in VCL, VSL and VAP speed parameters between these two periods. There was a significant effect (p<0.0001) of the “stallion” and “extender” factors on the studied variables but there wasn’t a significant interaction between these two factors. BotuCrio was the extender with the highest average motility after thawing (48%) and the Blue extender was the one with the lowest average motility (21%). As for the vitality, the Red extender presented the highest mean value (41%) while the Orange extender presented the lowest (34%). Regarding the hypoosmotic test, the Violet extender had a higher average of curled tails (47%), while BotuCrio had the lowest average value (35%). Motility showed a strong correlation with VCL (0.82) and VAP (0.77), a moderate correlation with VSL (0.56) and vitality (0.63), and did not show any correlation with the hypo-osmotic test (-0.01). The addition of cushion fluid had a significant effect on the variables motility (p<0,005), vitality (p<0,0005) and HOST (p<0,05). There was variability between stallions in the different parameters evaluated, more evident in motility, and within the same stallion, between different ejaculates, the amplitude of this variability being different depending on the stallion evaluated. Thus, in this work, it was not possible to determine the existence of a specific extender for each stallion that allowed the optimization of the cryopreservation process

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