روش بهینه‌سازی شده جداسازی و تخلیص DNA از جنس Alchemilla با استفاده از پلی‌اتیلن گلیکول
2020
سمیرا شوکتیاری | مرضیه بیگم فقیر | شاهرخ کاظم پور اصالو | محمد مهدی سوهانی
استخراج DNA برای مطالعات مولکولی ضروری بوده و استخراج خالص آن از گیاهان با مقادیر زیاد متابولیت‌های ثانویه بسیار مشکل است. جنس Alchemiila L. متابولیت‌های ثانویه متنوعی تولید می‌کند که باعث کاهش کیفیت DNA استخراجی می‌شوند. این مطالعه، با هدف استخراج آسان و ارزان DNA با کمیت و کیفیت بالا از نمونه‌های برگ این جنس انجام شد و نهایتا، سه روش استخراج DNA با هم مقایسه گردیدند. در انتخاب روش بهینه چند نکته اساسی مد نظر بود که شامل هزینه، سادگی و حذف مواد شیمیایی خطرناک می‌باشد. این مطالعه، با ایجاد تغییرات قابل توجهی در روش CTAB از قبیل تغییر حجم و غلظت بافر استخراج، مدت زمان انکوباسیون‌ها، انجام شش مرحله شستشو و سه مرحله رسوب، افزودن پلی‌اتیلن گلیکول و ﻫﻤﭽﻨﻴﻦ ﺣﺬف مواد ﭘﺮﻫﺰﻳﻨﻪ و خطرناک مانند نیتروژن مایع و بتا مرکاپتواتانول، قادر به جداسازی ایمن و ارزان، مقدار زیادی DNA با کیفیت مطلوب شد. کمیت و کیفیت DNAهای استخراجی توسط روش نانومتری، الکتروفورز ژل آگارز و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز مشخص گردید. طبق نتایج به دست آمده در این مطالعه، نسبت ۲۸۰/۲۶۰ DNA استخراجی به روش بهینه‌سازی شده، بین 75/1 تا 82/1و نسبت ۲۳۰/۲۶۰ بین 56/1 تا 68/1 با غلظت ۳۸۷ تا 595 نانوگرم در میکرولیتر اندازه‌گیری شد که این اعداد به طور قابل توجهی (p < 0.001) از اعداد مربوط به DNA حاصل از سایر روش‌ها بیشتر بود. پروتکل بهینه‌سازی شده، ساده، مؤثر، قابل تکرار، نسبتا غیرسمی و ارزان بود. نتایج این تحقیق همچنین نشان داد پروتکل مذکور در تولید مقادیر کافی از DNA با کیفیت قابل قبول برای سنجش‌های ژنتیکی موفق بود.
اظهر المزيد [+] اقل [-]الكلمات المفتاحية الخاصة بالمكنز الزراعي (أجروفوك)
المعلومات البيبليوغرافية
تم تزويد هذا السجل من قبل Directory of Open Access Journals