Ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) IgG indireto in-house com a proteína recombinante LipL32 para detecção de anticorpos anti-Leptospira spp. em soro canino | In-house indirect IgG Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) with the recombinant protein LipL32 for detection of anti-Leptospira spp. antibodies in canine serum

Leptospirosis is an infectious disease zoonotic and distributed worldwide, caused by bacteria of the genus Leptospira. The infection is predominantly acquired through direct contact with the urine of infected animals or, indirectly, through contact with contaminated environments (soil and water) or fomites. Dogs, in addition to being infected by the etiological agent and may present important clinical signs, are relevant in the epidemiological chain of the disease, as they can be considered sentinels, reservoirs and transmit the pathogenic agent to other susceptible individuals. The gold standard test to diagnose the infection is the microscopic seroagglutination test (MAT), an indirect methodology based on the detection of antibodies, primarily immunoglobulin (Ig) M. As limitations, the MAT is a subjective, laborious analysis, requires the maintenance of live antigens, specialized technicians and laboratories, and does not differentiate between IgM and IgG antibodies. Thus, the objective of the present study was to standardize and validate an In-house indirect IgG enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using the recombinant protein LipL32 to detect pathogenic anti-Leptospira spp. antibodies in canine sera. A total of 118 dog serum samples were evaluated by MAT and ELISA, obtaining an accuracy of 78%, sensitivity of 70.6% and specificity of 81%, demonstrating the capacity of this ELISA for use in the diagnosis of canine leptospirosis, as a test screening, as well as in research to evaluate the post-vaccination immune response.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS

A leptospirose é uma doença infecciosa causada por bactérias do gênero Leptospira, de natureza zoonótica e distribuição mundial. A infecção é adquirida, predominantemente, pelo contato direto com a urina de animais infectados ou, indiretamente, pelo contato com ambientes (solo e água) ou fômites contaminados. Os cães, além de serem infectados pelo agente etiológico podendo apresentar sinais clínicos importantes, são relevantes na cadeia epidemiológica da doença, pois podem ser considerados sentinelas, reservatórios e transmitir a bactéria para outros indivíduos suscetíveis. O teste padrão ouro para diagnosticar a infecção é a soroaglutinação microscópica (SAM), uma metodologia indireta baseada na detecção de anticorpos, prioritariamente, da imunoglobulina (Ig) M. Como limitações, a SAM é uma análise subjetiva, trabalhosa, requer a manutenção de antígenos vivos, técnicos e laboratórios especializados, e não diferencia os anticorpos IgM e IgG. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi padronizar e validar um ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) IgG indireto In-house utilizando a proteína recombinante LipL32 para detectar anticorpos anti-Leptospira spp., em soros caninos. Um total de 118 amostras de soro de cães foram avaliadas por SAM e ELISA obtendo uma acurácia de 78%, sensibilidade de 70,6% e especificidade de 81%, demonstrando a capacidade deste ELISA para uso no diagnóstico da leptospirose canina, como um teste de triagem, bem como em pesquisas para avaliação da resposta imune pós-vacinal.