Parâmetros reprodutivos e criopreservação espermática de cervos sambar (Rusa unicolor)

The information obtained on the reproductive biology of the sambar deer allows us to advance in conservationist research and contribute to studies on other endangered species of deer. In this context, the objective of this study was to evaluate the body, testicular, and tail biometrics of the epididymis and their correlations with the sperm characteristics of Sambar deer (Rusa unicolor), collected from the epididymis, evaluating the effects of cooling of the testicle epididymis complex at 5 ºC for 24 hours and the efficiency of different diluents in post-thawing sperm viability. Five adult sambar males of the Getúlio Vargas Zoobotanical Park, Salvador Ba. After anesthesia, the animals were ovariectomized and body, testicular, and tail measurements were estimated. The collected testicle-epididymal complexes were subjected to slice and flotation techniques to collect sperm from the epididymis tail in two moments. At first, the left complex was evaluated in nature, while the right one was subjected to a temperature of 5°C for 24 hours. The sperm samples collected from both treatments were diluted and cryopreserved in commercial OptiXcell (OP) medium and medium containing egg Tris-gema plus two cryoprotectors: glycerol (GL) and dimethylacetamide (DMA), in different concentrations, forming five experimental groups: G1 (GLI 3%); G2 (GLI 6%); G3 (OP); G4 (DMA3%) and G5 (DMA6%). The kinetics of sperm in nature, chilled, and after thawing were evaluated subjectively and through the computer-assisted semen analysis - CASA; functional integrity of the plasma membrane, by the hyposmotic test; integrity of the plasma and acrosomal membranes, using epifluorescence probes and mitochondrial activity. The data were evaluated for normality by the Shapiro-Wilk test, for variables that presented normal distribution, the data were submitted to Analysis of Variance, and for the variables that did not present normal distribution, the data were evaluated by the Kruskal Wallis test, adopting a significance level of 5%. The results showed that animals with greater head circumference (CFC), thoracic diameter (DT), withering height (AC), and body weight (PC) also have greater testicular and tail measurements of the epididymis. A positive and significant correlation (P<0.05) also existed between sperm parameters and testicle-epididymal biometrics. These data indicate that biometrics can be used as predictors of the reproductive efficiency of the sambar male and that the epididymal harvest can be an important source of sperm cells for reproduction programs in the species. When evaluating the effect of cooling for 24 h at 5ºC, a difference in the percentage of minor defects (P<0.05) was observed. In the post-thawing parameters, there was a difference in total motility, progressive, vigor, and sperm kinetics evaluated by CASA after thawing for the different experimental groups in both treatments (P<0.05). Inferring that the cooling of the testicle-epididymal complex preserved sperm kinetics and membrane integrity and can be used for assisted reproduction techniques and that diluents based on egg yolk and glycerol are more effective in preserving the viability of sperm, being preferable for sperm cryopreservation protocols of the sambar deer.

A biologia reprodutiva do cervo sambar permite avançar nas pesquisas conservacionistas, além de contribuírem para estudos em outras espécies de cervídeos ameaçados de extinção. Neste contexto, os objetivos com esse estudo foram avaliar as biometrias corporal, testicular e da cauda do epidídimo e suas correlações com características de espermatozoides epididimários de cervos Sambar (Rusa unicolor), além de avaliar os efeitos do resfriamento do complexo testículo-epidídimo a 5 ºC por 24 horas e a eficiência de diferentes diluentes na viabilidade espermática pós-descongelamento. Foram utilizados cinco machos adultos de cervo sambar provenientes do Parque Zoobotânico Getúlio Vargas, Salvador-Ba. Após anestesia, os animais foram orquiectomizados e medidas corporais, testiculares e da cauda do epidídimo aferidas. Os complexos testículo-epidídimo coletados, foram submetidos à técnica de slice e flutuação para colheita de espermatozoides da cauda do epidídimo em dois momentos. No primeiro momento, o complexo esquerdo foi avaliado in natura, enquanto o direito foi submetido à temperatura de 5°C por 24h. As amostras espermáticas colhidas de ambos os tratamentos foram diluídas e criopreservadas em meio comercial OptiXcell (OP) e meio contendo Tris-gema de ovo acrescido de dois crioprotetores: o glicerol (GL) e a dimetilacetamida (DMA), em diferentes concentrações, formando cinco grupos experimentais: G1 (GLI 3%); G2 (GLI 6%); G3 (OP); G4 (DMA3%) e G5 (DMA6%). A cinética dos espermatozoides in natura, refrigerado e após descongelamento foram avaliadas subjetivamente e por meio de avaliação computadorizada; integridade funcional de membrana plasmática, pelo teste hiposmótico; integridade das membranas plasmáticas e acrossomal, por meio de sondas de epifluorescência e atividade mitocondrial. Os dados foram avaliados quanto a normalidade pelo teste de Shapiro-Wilk, para variáveis que apresentaram distribuição normal, os dados foram submetidos à Análise de Variância, e para as variáveis que não apresentaram distribuição normal, os dados foram avaliados pelo teste Kruskal Wallis, adotando nível de significância de 5%. Os resultados apontaram que animais com maior circunferência de cabeça (CFC), diâmetro torácico (DT), altura da cernelha (AC) e peso corporal (PC) também apresentam maiores medidas testiculares e da cauda do epidídimo. Houve correlação positiva e significativa (P<0,05) também entre parâmetros espermáticos e as biometrias testículo-epididimária. Estes dados indicam que as biometrias podem ser utilizadas como predidoras da eficiência reprodutiva do macho de cervo sambar e que a colheita epididimária pode ser uma fonte importante de células espermática para programas de reprodução assistida na espécie. Ao avaliar o efeito do resfriamento por 24 h à 5ºC, foi observada diferença na porcentagem de defeitos menores (P<0,05). Nos parâmetros espermáticos pós-descongelamento, houve diferença para motilidade total, progressiva, vigor e cinética espermática avaliada pelo sistema computadorizado após descongelamento para os diferentes grupos experimentais em ambos os tratamentos (P<0,05). Inferindo que o resfriamento do complexo testículo-epidídimo preservou a cinética espermática e integridade de membrana, podendo ser utilizada para técnicas de reprodução assistida e que diluidores a base de gema de ovo e glicerol são mais eficazes na preservação da viabilidade dos espermatozoides, sendo preferível para protocolos de criopreservação espermática do cervo sambar.