<p class="Default">The high susceptibility of sperm to the oxidative stress occurs especially due to high content of poly-unsaturated fattyacids (PUFAs) in its plasma membrane. The PUFAs provide the necessary fluidity to the plasma membrane. Howeverdouble bonds present in those fatty acids are more susceptible to oxidative stress. Studies in human indicate thatcryopreservation may lead to damages to the sperm due to oxidative stress. This study aimed to verify if the antioxidantglutathione (GSH) may protect ovine cryopreserved sperm against damages caused by oxidative stress. Semen samplesof four rams were cryopreserved using Tris-egg yolk extender supplemented with different concentrations of reducedglutathione (control, 1, 5 and 10 mM). After thawing, samples were evaluated using conventional (motility and vigor)and functional tests (membrane integrity and mitochondrial activity). Aliquots of each thawed sample were submitted toprotocol of induced lipid peroxidation using ascorbate (20 mM) and ferrous sulphate (4 mM), with further measurementof tiobarbituric acid reactive substances (TBARS), index of oxidative stress. No effect of GSH was observed on variablesassessed by conventional tests. GSH decreased the proportion of intact acrosomes. Samples treated with 5 mM GSHshowed lower percentage of intact membrane cells when compared to control samples and those treated with 10 mM.The percentage of cells with mitochondrial activity was affected by GSH, but no effect on TBARS. Samples from controlgroup were more susceptible to denaturation of chromatin. In conclusion, the addition of Glutathione (GSH) offersprotection to DNA and mitochondrial activity of ovine sperm.</p> | Os ácidos graxos poli-insaturados garantem fluidez à membrana plasmática do espermatozoide. No entanto, as duplas ligações presentes, os tornam mais susceptíveis aos efeitos nocivos da peroxidação lipídica. A adição do antioxidante Glutationa reduzida (GSH) poderia conferir proteção aos espermatozoides de ovinos submetidos à congelação contra os graves danos causados pelo estresse oxidativo. O objetivo do presente experimento foi avaliar se a GSH protege os espermatozoides ovinos criopreservados contra danos causados pelo estresse oxidativo. Foram colhidos ejaculados de quatro carneiros adultos. As análises convencionais foram: concentração, motilidade, vigor e morfologia. As análises funcionais foram: integridade de membrana, integridade acrossomal, integridade de cromatina e atividade mitocondrial. O sêmen foi criopreservado utilizando o diluidor Tris-gema-critrato, suplementado com GSH (controle, 1, 5 e 10 mM). As amostras foram submetidas ao protocolo de peroxidação lipídica induzida e subsequente quantificação das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). As análises estatísticas foram realizadas utilizando o Sistema SAS para Windows. Não houve efeito do tratamento com GSH sobre as variáveis avaliadas pelos testes convencionais. A GSH diminuiu a proporção de acrossomas íntegros. Amostras tratadas com 5mM de GSH apresentaram menor percentual de células com membranas íntegras quando comparadas às amostras controle e aquelas tratadas com 10 mM; o percentual de células sem atividade mitocondrial foi influenciado pela GSH e também não houve efeito nas TBARS. As amostras do grupo controle foram mais susceptíveis à denaturação da cromatina. Em conclusão, a adição do antioxidante Glutationa reduzida confere proteção ao DNA e à atividade mitocondrial de espermatozoides de ovinos.

O objetivo do presente estudo foi avaliar se a composição proteica de plasma seminal, verificada por eletroforese bidimensional (2DE), pode interferir na congelabilidade do sêmen de touros, e se existe a possibilidade de predizer tal característica em touros doadores de sêmen. Amostras de 20 touros (diferentes raças) com mínimo de três anos de histórico de produção em Central de Coleta de sêmen foram coletadas. Todos os touros tinham de 2 a 7 anos de idade. A congelabilidade do sêmen foi calculada por no de ejaculados aprovados pós-descongelação / no de ejaculados submetidos à congelação (depois do crivo do padrão de qualidade da empresa para aprovar o ejaculado para ser submetido a congelação). Os touros foram divididos em três grupos: ALTA (=&gt;80% aproveitamento de ejaculados encaminhados à congelação); MÉDIA (&gt;60 a 79% ejaculados aprovados) e BAIXA (=&lt;59% ejaculados aprovados). Sessenta e oito corridas de géis 2DE foram avaliadas nas amostras de plasma seminal, que detectaram 225 spots com quantidade de proteína diferente entre as mesmas (VION). Pela estatística utilizada, comparando-se a congelabilidade do sêmen com quantidade de proteína detectada de cada spot (VION), constatou-se que 2 spots apresentaram-se com quantidade significativa de proteína diferente entre os dois grupos de congelabilidade do sêmen, considerando spots que foram detectados em mais de 75% das amostras corridas. Os touros taurinos apresentaram perfil proteico mais homogêneo quando comparado com os zebuínos, considerando número e frequência de spots. Tais resultados demonstram um potencial para uso da proteômica como ferramenta preditiva da congelabilidade do sêmen de touros, porém com necessidade de maiores estudos, principalmente para melhor compreensão de interações proteicas entre membrana espermática, plasma seminal e diluidores de sêmen utilizados, já que podem interferir no fenótipo proteico avaliado e na congelabilidade do sêmen, seja de forma positiva ou negativa. | The present study was undertaken the protein composition in 2D-electrophoretic pattern (2DE) of the seminal plasma (SP) can interfere in the semen bull freezability, and if we can use that for predicting semen bull freezability. Samples were obtained of 20 bulls (different breeds) with a minimum of 3 years history semen production in commercial semen collection Center. All animals ranged between 2 - 7 years of age. The semen freezability was calculated by # of thawed and approved ejaculates / # of ejaculates submitted to cryopreservation (after semen evaluation and approved to submitted to freeze). The bulls were divided in 3 groups: HIGH (=&gt;80% ejaculates approved); MEDIUM (&gt;60% and &lt;79% ejaculates approved); LOW (=&lt;59% ejaculates approved); the pattern and criteria were the same used in the routine of the commercial semen Center. 68 gels were carried through by 2DE of SP samples indicated 225 detected spots with protein different amount (VION) comparing. Comparing bull´s semen freezability and VION of each spot found difference among 2 spots from High and Low, even considering just spots with % of detection frequency bigger than 75%. The taurine bulls demonstrated more homogeneous profile when comparing with zebu bulls, considering number and frequency of appearance of spots. The results showed that proteomics can be a useful tool to predict the semen freezability, but we´ll need to study better the interactions between sperm membrane, seminal plasma and extender to comprehend better which proteome phenotype interfere positive or negatively in the semen freezability.

Nove amostras de sêmen de dois caprinos adultos, colhidas com a utilização de vagina artificial, foram submetidas a criopreservação, com o objetivo de verificar o efeito do Equex STM Paste e do EDTA, adicionados a um diluidor a base de Tris-gema de ovo, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. Também foi objetivo desse trabalho, avaliar a utilização de um diluidor comercial, a base de lecitina de soja (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, França), para a congelação do sêmen caprino. Assim, foram formados cinco grupos experimentais: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EQUEX+EDTA e Bioexcell. Logo depois da avaliação, o sêmen foi diluído nos diferentes meios e envasado em palhetas de 0,25 mL, com dose inseminante de 100 x 10(6) espermatozóides. As amostras foram submetidas ao resfriamento, com uma curva média de 0,46°C/min, até atingirem a temperatura de 5°C, mantidas por mais 75min em tempo de equilíbrio e, posteriormente, congeladas em nitrogênio líquido. A descongelação foi realizada em banho-maria a 37ºC por 50s. Não houve diferença (P>;0,05) entre as médias de motilidade total e progressiva, em relação aos grupos TRIS, TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA. O grupo Bioexcell obteve o menor (P<0,05) percentual de espermatozóides com motilidade total e progressiva após a descongelação. Após o teste de termoresistência, as melhores (P<0,05) taxas de motilidade total e progressiva foram observadas para os grupos com Equex STM (TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA). Assim, pode-se afirmar que a adição do Equex promove uma maior manutenção das taxas de viabilidade espermática após a descongelação, quando comparado com os diluidores que não o continham.

Os efeitos das temperaturas de imersão em nitrogênio líquido e dos métodos de remoção dos crioprotetores foram avaliados em mórulas de camundongos congeladas em etilenoglicol (E), propilenoglicol (P) e glicerol (G). Os embriões foram equilibrados em E (1,5M), P (1,5M) ou G (1,4M) por 10 minutos e envasados em palhetas de 0,25 ml com crioprotetor nas três colunas (E1, P1 G1) ou PBS nas colunas das extremidades (E2, P2). As palhetas foram resfriadas a 0,5ºC/minuto até -25 ou -30ºC e imersas em nitrogênio líquido. A descongelação dos embriões foi feita em água a 22ºC por 20 segundos. O crioprotetor dos embriões congelados em glicerol (Gl) foi removido em 3 etapas, dos congelados em etilenoglicol e propilenoglicol com crioprotetor nas 3 colunas (El e Pl) removido diretamente em PBS e dos congelados em etilenoglicol e propilenoglicol com PBS nas colunas das extremidades (E2, P2), após mistura das três colunas dentro da palheta, em PBS. Não houve influência da temperatura de imersão sobre o desenvolvimento embrionário in vitro, observando maior taxa (p < 0,0001) para El (69,2%) que para E2 (60,3%), Gl (51,9%) e a combinação P1 e P2 (46,9%). Para o desenvolvimento in vivo, a taxa de fetos foi menor (p < 0,07) para o grupo E1-25 do que para o Controle; Gl-30ºC; El-30ºC e E2-25ºC. Pode-se concluir que in vitro o melhor crioprotetor foi o etilenoglicol com remoção direta em PBS e que in vivo o etilenoglicol e o glicerol foram semelhantes a -30ºC.

<p>This work studied the surgical technique for collecting embryos in the goat, using heterozygous donors for the 5/15 translocation, which were bred with translocated animals. At the same, time technical characteristics related to cryopreservation, thawing and cultivation of the structures were performed. Considering the superovulatory treatment, oestrus was observer 24 or 48 hours after removing the intravaginal sponge and 71 viable structures were yielded in 43 collections. The 1 -2 Propanediol proved to be an efficient cryoprotectant agent, and allowed the cultivation of all the embryos. This result was not observed when glycerol was used as a cryoprotectant agent. Adhesions due to multiple collections constitute a great challenge for the improvement of this technique, since they are considered a limiting factor to the use of donors in the beginning of their reproductive lives.</p> | <p>No presente trabalho foi realizado um estudo da técnica cirúrgica de coleta de embriões na espécie caprina, utilizando-se doadoras heterozigotas para a translocação 5/15, acasaladas com animal translocado. Simultaneamente foram observados aspectos técnicos inerentes à criopreservação, descongelação e cultivo das estruturas recuperadas. Frente ao tratamento superovulatório, o cio foi observado em 24 ou 48 horas após a remoção da esponja intravaginal e foram recuperadas 71 estruturas viáveis em 43 coletas. O 1 -2 Propanodiol mostrou-se eficiente criopreservador, permitindo cultivo de todos os embriões, fato não observado quando utilizou-se o Glicerol. As aderências provocadas pelas repetidas coletas constituem-se no grande desafio no sentido de se aperfeiçoar a técnica, pois são consideradas um fator limitante ao uso de doadores no início da vida reprodutiva.</p>

O objetivo do presente estudo foi avaliar se a composição proteica de plasma seminal, verificada por eletroforese bidimensional (2DE), pode interferir na congelabilidade do sêmen de touros, e se existe a possibilidade de predizer tal característica em touros doadores de sêmen. Amostras de 20 touros (diferentes raças) com mínimo de três anos de histórico de produção em Central de Coleta de sêmen foram coletadas. Todos os touros tinham de 2 a 7 anos de idade. A congelabilidade do sêmen foi calculada por no de ejaculados aprovados pós-descongelação / no de ejaculados submetidos à congelação (depois do crivo do padrão de qualidade da empresa para aprovar o ejaculado para ser submetido a congelação). Os touros foram divididos em três grupos: ALTA (=>80% aproveitamento de ejaculados encaminhados à congelação); MÉDIA (>60 a 79% ejaculados aprovados) e BAIXA (=<59% ejaculados aprovados). Sessenta e oito corridas de géis 2DE foram avaliadas nas amostras de plasma seminal, que detectaram 225 spots com quantidade de proteína diferente entre as mesmas (VION). Pela estatística utilizada, comparando-se a congelabilidade do sêmen com quantidade de proteína detectada de cada spot (VION), constatou-se que 2 spots apresentaram-se com quantidade significativa de proteína diferente entre os dois grupos de congelabilidade do sêmen, considerando spots que foram detectados em mais de 75% das amostras corridas. Os touros taurinos apresentaram perfil proteico mais homogêneo quando comparado com os zebuínos, considerando número e frequência de spots. Tais resultados demonstram um potencial para uso da proteômica como ferramenta preditiva da congelabilidade do sêmen de touros, porém com necessidade de maiores estudos, principalmente para melhor compreensão de interações proteicas entre membrana espermática, plasma seminal e diluidores de sêmen utilizados, já que podem interferir no fenótipo proteico avaliado e na congelabilidade do sêmen, seja de forma positiva ou negativa.

Os ácidos graxos poli-insaturados garantem fluidez à membrana plasmática do espermatozoide. No entanto, as duplas ligações presentes, os tornam mais susceptíveis aos efeitos nocivos da peroxidação lipídica. A adição do antioxidante Glutationa reduzida (GSH) poderia conferir proteção aos espermatozoides de ovinos submetidos à congelação contra os graves danos causados pelo estresse oxidativo. O objetivo do presente experimento foi avaliar se a GSH protege os espermatozoides ovinos criopreservados contra danos causados pelo estresse oxidativo. Foram colhidos ejaculados de quatro carneiros adultos. As análises convencionais foram: concentração, motilidade, vigor e morfologia. As análises funcionais foram: integridade de membrana, integridade acrossomal, integridade de cromatina e atividade mitocondrial. O sêmen foi criopreservado utilizando o diluidor Tris-gema-critrato, suplementado com GSH (controle, 1, 5 e 10 mM). As amostras foram submetidas ao protocolo de peroxidação lipídica induzida e subsequente quantificação das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). As análises estatísticas foram realizadas utilizando o Sistema SAS para Windows. Não houve efeito do tratamento com GSH sobre as variáveis avaliadas pelos testes convencionais. A GSH diminuiu a proporção de acrossomas íntegros. Amostras tratadas com 5mM de GSH apresentaram menor percentual de células com membranas íntegras quando comparadas às amostras controle e aquelas tratadas com 10 mM; o percentual de células sem atividade mitocondrial foi influenciado pela GSH e também não houve efeito nas TBARS. As amostras do grupo controle foram mais susceptíveis à denaturação da cromatina. Em conclusão, a adição do antioxidante Glutationa reduzida confere proteção ao DNA e à atividade mitocondrial de espermatozoides de ovinos.

The aim of this paper was verifying the effect of the Equex STM Paste and EDTA addition to a Tris-egg yolk extender, on the post-thaw goat sperm viability. Nine semen samples of two adult goats were collected by artificial vagina and cryopreserved. It was also objective of this study, to evaluate the utilization of a soybean lecithin based commercial extender (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, French) for the goat semen freezing. They were formed five experimental groups: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EDTA+EQUEX e Bioexcell. After evaluation, the semen was diluted in the five extenders and packed in 0.25mL straws with 100 million of motile spermatozoa. The samples were cooled at 0,46°C/min to 5°C, submitted at 75min of equilibration time and frozen in liquid nitrogen vapour. The thawing was accomplished in 37ºC water bath for 50s. There were no differences (P&gt;;0,05) on the means of post-thaw total and progressive sperm motility among the groups TRIS, TRIS+EQUEX and TRIS+EQUEX+EDTA. The Bioexcell group obtained the least (P&lt;0,05) percentage of post-thawing total and progressive sperm motility. After the thermotolerance test, it was observed the greatest (P&lt;0,05) rates of total and progressive sperm motility in the Equex STM groups (TRIS+EQUEX and TRIS+EQUEX+EDTA). Thus, it can be affirmed that the Equex addition promotes better maintenance rates in the pos-thaw sperm viability, when compared with the extenders that did not contain it. | Nove amostras de sêmen de dois caprinos adultos, colhidas com a utilização de vagina artificial, foram submetidas a criopreservação, com o objetivo de verificar o efeito do Equex STM Paste e do EDTA, adicionados a um diluidor a base de Tris-gema de ovo, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. Também foi objetivo desse trabalho, avaliar a utilização de um diluidor comercial, a base de lecitina de soja (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, França), para a congelação do sêmen caprino. Assim, foram formados cinco grupos experimentais: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EQUEX+EDTA e Bioexcell. Logo depois da avaliação, o sêmen foi diluído nos diferentes meios e envasado em palhetas de 0,25 mL, com dose inseminante de 100 x 10(6) espermatozóides. As amostras foram submetidas ao resfriamento, com uma curva média de 0,46°C/min, até atingirem a temperatura de 5°C, mantidas por mais 75min em tempo de equilíbrio e, posteriormente, congeladas em nitrogênio líquido. A descongelação foi realizada em banho-maria a 37ºC por 50s. Não houve diferença (P&gt;;0,05) entre as médias de motilidade total e progressiva, em relação aos grupos TRIS, TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA. O grupo Bioexcell obteve o menor (P&lt;0,05) percentual de espermatozóides com motilidade total e progressiva após a descongelação. Após o teste de termoresistência, as melhores (P&lt;0,05) taxas de motilidade total e progressiva foram observadas para os grupos com Equex STM (TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA). Assim, pode-se afirmar que a adição do Equex promove uma maior manutenção das taxas de viabilidade espermática após a descongelação, quando comparado com os diluidores que não o continham.

The present study compared powder coconut water (ACP®) and Tris extenders on canine semen cryopreservation by classic evaluation and thermoresistance test. Five stud dogs were submitted to two semen collections by digital manipulation. Sperm fractions were analyzed regarding to its color, volume, sperm concentration, motility, vigor and morphology. Semen samples were divided into two aliquots: the first one was extended in Tris and second one in ACP®. Both extenders contained 20% egg yolk. Samples were cooled to 5ºC, glycerol added (6%), packaged in 0.25mL straws, frozen in nitrogen vapors and finally stored in liquid nitrogen. One week later, thaw was performed at 38ºC per 1min in water bath and new evaluations of sperm motility, vigor and morphology were conducted. Samples were kept at 38ºC in water bath and evaluated at 15 and 30min after thaw. No significant difference was observed between extenders throughout cryopreservation or thawing procedures, as well as during thermoresistance test, concerning to characteristics evaluated. Tris and ACP® were efficient in conserving 50% mobile spermatozoa and 70% morphologically normal sperm after thaw. Thus, ACP® can be used as an alternative extender for canine semen cryopreservation. | O presente trabalho comparou a água de coco em pó (ACP®) com o diluidor Tris na criopreservação do sêmen canino através da avaliação clássica e do teste de termorresistência. Cinco reprodutores caninos foram submetidos a duas coletas de sêmen através de manipulação digital. As frações espermáticas foram avaliadas quanto à sua coloração, volume, concentração, motilidade, vigor e morfologia espermática. As amostras de sêmen foram divididas em duas alíquotas: a primeira foi diluída em Tris e a segunda em ACP®. Ambos os diluidores continham 20% de gema de ovo. As amostras foram refrigeradas, adicionadas de glicerol (6%), envasadas em palhetas de 0,25mL, criopreservadas em vapores de nitrogênio, e finalmente armazenadas em nitrogênio líquido. Após uma semana, foi realizada a descongelação a 38ºC por 1min em banho-maria, sendo realizadas novas avaliações de motilidade, vigor e morfologia espermática. As amostras foram mantidas a 38ºC no banho-maria e avaliadas aos 15 e 30 min após descongelação. Não foram observadas diferenças significativas entre os dois diluidores no decorrer dos procedimentos de criopreservação e descongelação, bem como durante o teste de termorresistência, em relação às características avaliadas. O Tris e o ACP® foram eficientes em conservar 50% de espermatozóides móveis e 70% de espermatozóides morfologicamente normais após a descongelação. Assim, o ACP® pode ser utilizado como diluidor alternativo para a criopreservação do sêmen canino.

O presente trabalho comparou a água de coco em pó (ACP®) com o diluidor Tris na criopreservação do sêmen canino através da avaliação clássica e do teste de termorresistência. Cinco reprodutores caninos foram submetidos a duas coletas de sêmen através de manipulação digital. As frações espermáticas foram avaliadas quanto à sua coloração, volume, concentração, motilidade, vigor e morfologia espermática. As amostras de sêmen foram divididas em duas alíquotas: a primeira foi diluída em Tris e a segunda em ACP®. Ambos os diluidores continham 20% de gema de ovo. As amostras foram refrigeradas, adicionadas de glicerol (6%), envasadas em palhetas de 0,25mL, criopreservadas em vapores de nitrogênio, e finalmente armazenadas em nitrogênio líquido. Após uma semana, foi realizada a descongelação a 38ºC por 1min em banho-maria, sendo realizadas novas avaliações de motilidade, vigor e morfologia espermática. As amostras foram mantidas a 38ºC no banho-maria e avaliadas aos 15 e 30 min após descongelação. Não foram observadas diferenças significativas entre os dois diluidores no decorrer dos procedimentos de criopreservação e descongelação, bem como durante o teste de termorresistência, em relação às características avaliadas. O Tris e o ACP® foram eficientes em conservar 50% de espermatozóides móveis e 70% de espermatozóides morfologicamente normais após a descongelação. Assim, o ACP® pode ser utilizado como diluidor alternativo para a criopreservação do sêmen canino.