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Clinical and epidemiological characterization of leishmaniasis in dogs in São Paulo State | Caracterização clínica e epidemiológica das leishmanioses em cães no Estado de São Paulo
2013
Cauê Pereira Toscano | Claudio Nazaretian Rossi | Vítor Márcio Ribeiro | Marcia Dalastra Laurenti | Carlos Eduardo Larsson
<!--[if gte mso 9]><xml> <o:OfficeDocumentSettings> <o:AllowPNG/> </o:OfficeDocumentSettings> </xml><![endif]--><p class="MsoNormal"><span style="mso-ansi-language: EN-US;" lang="EN-US">The occurrence of visceral or cutaneous canine leishmaniasis cases among dermatophatic dogs admitted to the veterinary teaching hospital School of Veterinary Medicine and Animal Husbandry - University of São Paulo from 1997 to 2008 was retrospectively characterized. For the diagnosis of 427 animals, serological (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, Indirect Immunofluorescence and/or Complement Fixation), parasitological and molecular (Polymerase Chain Reaction) tests were performed, which resulted in 117 (27.4%) confirmed positive cases. Of these, 96 (82.1%) were pure breed dogs and the others 21 (17.9%) were cross breed, being 57 (48.7%) females and 60 (51.3%) males. In terms of age, 26 (22.2%) were younger than 36 months, 48 (41%) were between 36 and 84 months, and 43 (36.8%) were older than seven years old. Sixty-four (54.7%) dogs were considered oligosymptomatic, 44 (37.6%) symptomatic, and the remaining nine (7.7%) asymptomatic. The main clinical findings were, in descending order, dermal lesions, lymphadenopathy, anemia, dysorexia, prostration and splenomegaly. As for hematological disorders, relative and absolute lymphopenia was the most important findings. Ninety-six (82.1%) of the positive animals correspond to allochthonus cases from São Paulo municipality.</span></p> | <!--[if gte mso 9]><xml> <o:OfficeDocumentSettings> <o:AllowPNG/> </o:OfficeDocumentSettings> </xml><![endif]--><p class="MsoNormal">Caracterizou-se retrospectivamente, a partir do ano de 1997 até março de 2008, a ocorrência de casos de leishmaniose, visceral ou tegumentar, dentre os cães dermatopatas atendidos em serviço especializado de hospital-escola veterinário de Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. Para o diagnóstico em 427 animais, foram utilizados testes sorológicos (Ensaio Imunoenzimático Indireto, Imunofluorescência Indireta e/ou Fixação de Complemento), parasitológicos diretos e moleculares (Reação em Cadeia da Polimerase), que resultaram na confirmação de 117 (27,4%) casos positivos. Da amostragem, 96 (82,1%) eram cães de raça definida, os demais 21 (17,9%) não dispunham de plena definição racial, sendo 57 (48,7%) fêmeas e 60 (51,3%) machos. Quanto à faixa etária, 26 (22,2%) apresentavam idade inferior a 36 meses, 48 (41%) entre 36 e 84 meses e 43 (36,8%) ultrapassavam o sétimo ano de vida. Considerou-se 64 (54,7%) cães como oligossintomáticos, 44 (37,6%) sintomáticos e os nove (7,7%) remanescentes como assintomáticos. As principais alterações clínicas observadas foram, em ordem decrescente, lesões tegumentares, linfonodomegalia, anemia, disorexia, prostração e esplenomegalia. Quanto às alterações hematológicas, a mais importante foi a linfopenia relativa e absoluta. Dos animais positivos para a enfermidade, 96 (82,1%) correspondeu a casuística alóctone ao Município de São Paulo.</p><!--[if gte mso 9]><xml> <w:WordDocument> <w:View>Normal</w:View> <w:Zoom>0</w:Zoom> <w:TrackMoves/> <w:TrackFormatting/> <w:HyphenationZone>21</w:HyphenationZone> <w:PunctuationKerning/> <w:ValidateAgainstSchemas/> <w:SaveIfXMLInvalid>false</w:SaveIfXMLInvalid> <w:IgnoreMixedContent>false</w:IgnoreMixedContent> <w:AlwaysShowPlaceholderText>false</w:AlwaysShowPlaceholderText> <w:DoNotPromoteQF/> <w:LidThemeOther>PT-BR</w:LidThemeOther> <w:LidThemeAsian>X-NONE</w:LidThemeAsian> <w:LidThemeComplexScript>X-NONE</w:LidThemeComplexScript> <w:Compatibility> <w:BreakWrappedTables/> <w:SnapToGridInCell/> <w:WrapTextWithPunct/> <w:UseAsianBreakRules/> <w:DontGrowAutofit/> <w:SplitPgBreakAndParaMark/> <w:EnableOpenTypeKerning/> <w:DontFlipMirrorIndents/> <w:OverrideTableStyleHps/> </w:Compatibility> <m:mathPr> <m:mathFont m:val="Cambria Math"/> <m:brkBin m:val="before"/> 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اظهر المزيد [+] اقل [-]Infecção por Leishmania sp. em cães de Florianópolis, Santa Catarina, Brasil | Leishmania sp. infection in dogs from Florianópolis, Santa Catarina, SC, Brazil
2013
Acácio Duarte Pacheco | Marcia Dalastra Laurenti | Valéria Marçal Félix de Lima | Thaise Yumie Tomokane | Mary Marcondes
O objetivo do presente estudo foi pesquisar a ocorrência de infecção por Leishmania sp. em cães (N = 491) domiciliados no município de Florianópolis, Santa Catarina, considerada uma região indene para leishmaniose visceral até o ano de 2011, quando foram notificados casos autóctones da doença canina. A soroprevalência na população foi avaliada por ELISA (0,4%; 2/491) e RIFI (4,09%; 24/491). Somente um cão apresentou sororeatividade em ambos os métodos sorológicos, totalizando 25 (5,3%) animais sororeagentes. O DNA de Leishmania sp., obtido de uma amostra do sangue total desse animal, foi amplificado por PCR convencional e PCR em Tempo Real. Não foi possível realizar o sequenciamento do DNA amplificado e, deste modo, determinar a espécie de Leishmania envolvida. Os nossos resultados sugerem a necessidade de uma investigação epidemiológica minuciosa em Florianópolis. | The aim of the present study was to investigate the occurrence of Leishmania sp. infection in dogs (N = 491) living in the municipality of Florianópolis, Santa Catarina (SC), Brazil, which was considered a disease-free region for visceral leishmaniasis until 2011, when autochthonous cases of canine disease were notified. Seroprevalence in this population was assessed by ELISA (0.4%; 2/491) and IFAT (4.09%; 24/491). Only one dog exhibited seroreactivity in both serological methods, comprising a total of 25 (5.3%) seroreagent animals. Leishmania sp. DNA, obtained from a sample of whole blood of this animal, was amplified by both conventional and Real-Time PCR. Sequencing of the amplified DNA and, thereby, determination of the Leishmania species involved, was not possible. Our results suggest the necessity of a thorough epidemiological investigation in Florianópolis.
اظهر المزيد [+] اقل [-]Experiments on intramuscular inoculation and feeding domestic cats (Felis catus) with brains of mice previously infected by rabies viruses | Ensaios sobre inoculação intramuscular e alimentação de gatos domésticos (Felis catus) com cérebros de camundongos préviamente inoculados com vírus da raiva
2007
Renata Kashiwakura Shirakawa | Adriana Cortez | Leonardo José Richtzenhain | Takuya Itoou | Takeo Sakai | Fumio Honma Ito
Nineteen kittens divided into four groups were fed with brains of mice infected with rabies viruses. Each four kittens (group I) received four brains infected with the PV fixed strain; nine kittens (group II) ingested 4-5 brains infected with the field isolate T-9/95, isolated from the Desmodus rotundus vampire bat; two kittens (group III) fed ten T-9/95-infected brains, and four cats consumed 32-37 PV strain-infected brains. One adult male, inoculated into masseter muscle with a 20% T-9/95-infected brain suspension, presented rabies after an incubation period of six days, followed with 8 days of clinical evolution, and died thereafter and this cat was considered as the rabies "positive standard". After observing for 20-230 days, all the cats feeding the rabid brains were submitted to euthanasia, by using Acepran®, Zoletil®, and T-61®. At necropsy, samples of brain, heart, lung, kidney, submaxillary salivary gland, and cervical medulla were collected from all the cats and further submitted to the direct fluorescence antibody test (dFA), mouse inoculation test (MIT) and to the reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) technique. Brain, cervical medulla, and the submaxillary salivary gland of the positive standard cat were dFA-positive, and brain and cervical medulla were positive for MIT. All specimens of this cat tested by the RT-PCR were found positive. No animals ingesting PV or T-9/95 virus-infected brains developed clinical signs and all materials tested were negative by dFA and MIT. Several specimens, however, showed positive reactions by the RT-PCR technique, but cats were resistant to rabies through the viruses administered orally. | Dezenove gatos, divididos em quatro grupos, foram alimentados com cérebros de camundongos infectados com vírus de raiva. Cada um dos quatro gatos (grupo I) receberam quatro cérebros infectados com vírus fixo PV; nove gatos (grupo II) ingeriram 4-5 cérebros infectados com uma amostra de campo T-9/95, isolada do morcego Desmodus rotundus; dois gatos (grupo III) ingeriram 10 cérebros infectados com T-9/95 e quatro gatos (grupo IV) ingeriram 32-37 cérebros infectados com vírus PV. Um macho adulto, inoculado no músculo masséter, com uma suspensão cerebral a 20% da amostra T-9/95, desenvolveu raiva após período de incubação de seis dias, seguidos por oito dias de evolução clínica, morrendo em seguida. Este gato foi denominado de "padrão positivo". Após observação por um período de 20-230 dias, todos os gatos que receberam cérebros foram submetidos à eutanásia, utilizando Acepran®, Zoletil® e T-61®. À necropsia, foram colhidas amostras do cérebro, coração, pulmão, rim, glândula salivar submaxilar e medula cervical e submetidas à prova de imunofluorescência direta (IFD), inoculação em camundongos (IC), e reação em cadeia pela polimerase-transcriptase reversa (RT-PCR). No "padrão positivo", cérebro, medula cervical e glândula salivar foram positivos à IFD e à IC, cérebro e medula cervical foram os positivos. Todos os espécimes do "padrão positivo" foram positivos à RT-PCR. Nenhum animal que ingeriu cérebros contendo amostras de vírus PV ou T-9/95 apresentou sinais clínicos e todos os espécimes testados foram negativos à IFD e IC, no entanto, alguns espécimes reagiram positivamente à RT-PCR, porém, os gatos foram resistentes à raiva com vírus administrados oralmente.
اظهر المزيد [+] اقل [-]Comparison of three serological tests applied to diagnosis of the Brucella canis infection in dogs | Comparação de três testes sorológicos aplicados ao diagnóstico da infecção de caninos por Brucella canis
2004
Sérgio Santos de Azevedo | Sílvio Arruda Vasconcellos | Lara Borges Keid | Lília Márcia Paulin da Silva Grasso | Sônia Regina Pinheiro | Roberta Mascolli | Clebert José Alves
The agar gel immunodiffusion test (AGID), agar gel immunodiffusion test in sera treated by 2-mercaptoethanol (ME-AGID) and complement fixation test (CFT), applied to diagnosis of the canine brucellosis due to Brucella canis, were compared. For this purposes, 80 blood samples from dogs were collected during the rabies vaccination campaign of Santana de Parnaíba municipality, State of São Paulo, in August 1999. The antigens used in the AGID and ME-AGID tests were lipopolysaccharides and proteins from Brucella ovis, strain Reo 198, and in the CFT, the antigen employed was Brucella ovis, strain 63/290. The serological tests were compared two by two by Mc Nemar test, and the agreement was analyzed by the Kappa indicator. The agreement between the CFT and ME-AGID was moderate (Kappa = 0.54), between the AGID and CFT was fair (Kappa = 0.36) and between the AGID and ME-AGID was fair (Kappa = 0.39). | Foram comparados os testes de imunodifusão em gel de ágar (IDGA), imunodifusão em gel de ágar em soros tratados pelo 2-mercaptoetanol (IDGA-ME) e reação de fixação de complemento (CFT), aplicados ao diagnóstico da infecção de caninos por Brucella canis. O antígeno utilizado nas técnicas de IDGA e IDGA-ME constituiu-se de lipopolissacarídeos e proteínas de Brucella ovis, amostra Reo 198, e na CFT, o antígeno empregado foi a Brucella ovis, amostra 63/290. Foram examinadas 80 amostras de soro sanguíneo de cães colhidas durante a campanha de vacinação anti-rábica animal do Município de Santana de Parnaíba-SP, realizada em agosto de 1999. As provas sorológicas foram comparadas, duas a duas, pelo teste de Mc Nemar, e a concordância foi analisada pelo indicador Kappa. A concordância entre as técnicas de CFT e IDGA-ME foi regular (Kappa = 0,54), entre as técnicas de IDGA e CFT foi sofrível (Kappa = 0,36) e entre as provas de IDGA e IDGA-ME também foi sofrível (Kappa = 0,39).
اظهر المزيد [+] اقل [-]Evaluation of rapid agglutination, tube agglutination, buffered plate antigen and 2-mercaptoethanol tests in the diagnosis of bovine brucellosis | Avaliação das provas de soroaglutinação rápida, soroaglutinação lenta, antígeno acidificado e 2-mercaptoetanol no diagnóstico da brucelose bovina
2000
Jane Megid | Márcio Garcia Ribeiro | Gilberto Marcos Júnior | Adalberto José Crocci
Bovine serums were evaluated by the plate agglutination, tube agglutination, buffered plate antigen and 2-Mercaptoethanol tests for bovine brucellosis diagnosis. All presented a good concordance when considering the official Ministry of Agriculture interpretation. High concordance was verified for the buffered plate antigen and 2-Mercapthoetanol tests. This study suggests the use of the buffered plate antigen test as a screening test for bovine brucellosis diagnosis. | Avaliaram-se comparativamente as provas de soroaglutinação rápida, soroaglutinação em tubo, 2-mercaptoetanol e antígeno tamponado acidificado no diagnóstico da brucelose bovina. Todas as provas apresentaram boa concordância quando considerada a interpretação preconizada pelo Ministério da Agricultura do Brasil. As provas do antígeno tamponado acidificado e do 2-mercaptoetanol apresentaram alta concordância. Neste sentido, o presente estudo propõe o uso da prova do antígeno tamponado acidificado como triagem para o diagnóstico da brucelose bovina.
اظهر المزيد [+] اقل [-]Serological survey for bovine herpesvirus 1 in cattle from different regions in the state of Bahia, Brazil | Levantamento sorológico para herpesvírus bovino 1 em bovinos de diferentes regiões do Estado da Bahia, Brasil
2000
Robson Bahia Cerqueira | Renato Carminati | Josiane Martins Silva | Gubio Campos Soares | Roberto Meyer | Silvia Sardi
The presence of antibodies against BHV-1 was evaluated in young bovines from fifteen different counties distributed along North, South and Central regions of the state of Bahia. Bovines with age ranged from 1 to 4 years old, non-vaccinated against BHV-1 and without diagnostic of BHV-1 infection were chosen for blood collection. A total of 558 serum samples were collected equivalent to 10% of the population in each farm. The sera were submitted to ELISA (HerdCheck-IDDEX) and Microserum neutralization (MSN) tests. The MSN was performed in monolayers of MDBK cells in microplates using Los Angeles BHV-1 strain. The results of serum samples by ELISA showed that 56% (314/558) were positive and 44% (244/558) were negative. The sera assayed by MSN showed that 48% (269/558) were negative and 52% (289/558) were positive. These positive sera demonstrated that 54% had serumneutralization titer between 4-16, 35% between 32-64 and 11% >; or = 64. Our results suggest that the virus is circulating actively in herds. Furthermore, the high diffusion of the BHV-1 in young bovines could represent a constant source of viral infection in the herd. | A presença de anticorpos contra Herpesvírus Bovino tipo 1 (HBV-1) foi avaliada em bovinos jovens provenientes de quinze municípios diferentes, distribuídos nas regiões Norte, Sul e Central do estado da Bahia. Foram coletadas amostras de sangue de bovinos de 1 a 4 anos de idade, não vacinados contra HBV-1 e sem prévio diagnóstico de infecção pelo vírus HBV-1. O total de amostras correspondeu a 558 soros, equivalente a 10% da população bovina de cada fazenda. Os 558 soros foram submetidos à técnica de Microssoroneutralização (MSN) em microplacas, utilizando-se monocamadas de células MDBK e a cepa de HBV-1 Los Angeles, e ao teste de ELISA comercialmente adquirido: HerdCheck-IDDEX. Os resultados da amostragem feito pelo teste de ELISA mostraram que 56% (314/558) dos soros foram positivos e 44% (244/558), negativos. A técnica de MSN mostrou que 48% (269/558) dos soros foram negativos e 52% (289/558) foram positivos. Destes soros positivos, 54% tiveram títulos soroneutralizantes entre 4-16, 35% entre 32-64, e 11% >; ou = 64. Os resultados sugerem que o HBV-1 esteja circulando ativamente na população bovina jovem. Por outra parte, a alta difusão do vírus em animais jovens representaria uma fonte contínua de infecção viral para o rebanho.
اظهر المزيد [+] اقل [-]Revaluation of the film test as a screening test for' Eurytrema sp infection in cattle | Reavaliação da prova do filme como método de diagnóstico presuntivo de infecção por Eurytrama sp em bovinos
1992
Pacífico Antonio Diniz Belém | Mauro Rodrigues de Oliveira | Carlos Roberto Padovani
Film test was performed in fecal samples of Eurytrema sp infected and non infected cattle but both groups showed similar results. So, it was concluded that film test is an unreliable one for screening Eurytrema sp infection in cattle. | Amostras fecais de bovinos comprovadamente parasitados e outras de animais possuidores de pâncreas macroscopicamente normais (controle) foram submetidas à prova do filme. Os resultados mostraram que tanto os animais parasitados quanto aqueles do grupo controle comportaram-se de modo semelhante à prova do filme. Com isto, concluiu-se que o referido teste deve ser desconsiderado para os fins propostos de diagnóstico presuntivo de infecções por Eurytrema sp em bovinos.
اظهر المزيد [+] اقل [-]Desempenho do teste rápido imunocromatográfico (TRI) para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina: comparação com outros métodos sorológicos em cães suspeitos de Cuiabá, Mato Grosso, Brasil | Performance of DPP™ immunochromathographic rapid test (IRT) for canine visceral leishmaniasis: comparison with other serological methods in suspected dogs from Cuiabá, Mato Grosso State, Brazil
2013
Bianca De Santis | Elizabeth Gloria Barbosa Santos | Celeste da Silva Freitas de Souza | Sérgio Augusto de Miranda Chaves
O teste rápido imunocromatográfico (TRI) para leishmaniose visceral canina (LVC) foi testado em cães suspeitos da área urbana de Cuiabá. O desempenho do teste foi comparado com RIFI e ELISA e, como padrão ouro, o teste parasitológico direto (TPD). A amostra com 45 cães foi selecionada pelo Centro de Controle de Zoonoses, sendo 23 (51,1%) machos, 34 (75,5%) sem raça definida e com idade estimada inferior a três anos. De acordo com os dados clínicos e os exames laboratoriais, 10 (26,3%) cães foram classificados como expostos, outros 10 (26,3%) como infectados e 18 (47,4%) como doentes. O TRI alcançou os melhores resultados quanto à sensibilidade, 62%, elevada especificidade, 87% e para os valores preditivos positivo e negativo: 83,30% e 81,48%, respectivamente, consolidado pelo coeficiente Kappa igual a 0,50, de concordância moderada. Os resultados confirmaram TRI como um bom preditor de doença e infecção para LVC. | The immunochromathographic rapid test (IRT) for canine visceral leishmaniasis (CVL) was tested in suspected dogs from the urban area of Cuiabá. The performance of IRT was compared with IFT and EIE and the direct parasitological test (DPT) as the gold standard. The sample, comprising 45 dogs, was selected by the Zoonosis Control Center. Twenty (51%) were male and thirty-four (75.5%) were both mongrel and had an estimated age of less than three years old. According to clinical data and lab tests: 10 (26.3%) dogs have been classified as exposed or infected and 18 (47.4%) as sick. IRT has achieved the best result for sensibility, 62%, high specificity, 87% and for positive and negative predictive values: 83.3% and negative 81.48%, respectively, reinforced by a k coefficient equal to 0.50, representing substantial agreement.
اظهر المزيد [+] اقل [-]Evaluation of two methods for early pregnancy diagnosis in ewes: transrectal ultrasonography and pregnancy detector for small ruminant (DPPR-80®) | Avaliação de dois métodos de diagnóstico precoce de gestação em ovelhas: ultra-sonografia transretal e detector de prenhez para pequenos ruminantes (DPPR-80®)
2003
Claudia Veronica Calamari | Sílvia Ferrari | Frederico Fontoura Leinz | Carlos Frederico de Carvalho Rodrigues | Diorandi Bianchini | Fernando Ferreira | Ricardo Augusto Dias
Ultrasonography was perfomed in 88 ewes from Núcleo de Pesquisas Zootécnicas Sudoeste - Instituto de Zootecnia, São Paulo state, from march to may , 2001. Animals were examined from 19º to 33º days of pregnancy by transrectal ultrasonography in alternate days examinations, and by pregnancy detector for small ruminants (DPPR-80Ò) from 25º to 45º day. Positive diagnostic by transretal ultrasonography was obtained after yolk sac visualization. The embryo heartbeat was observed after 25 day of pregnancy. The positive diagnostic was obtained by pregnancy detector when embrionic heart was 160 to 200 beats/minute. Births confirmed the examinations. Three abortions ocurred during the experiment and these females were excluded from the group. From 85 ewes examined, 64 lambed. The transrectal ultrasonography accuracy in 19º day of pregnancy was 35,29%, with higher rate (82,53%) in 31º day. The doppler accuracy in 25º day was 24,71% and 34,12.00% in 45º day. Embryo heartbeat was detected by transrectal ultrasonography after 21 days of pregnancy and the first placentoms were observed after 25 days of pregnancy. In conclusion, transrectal ultrasonography was better than doppler in early pregnancy diagnosis in sheep. | No período de março a maio de 2001, foram realizados os exames ultra-sonográficos em 88 ovelhas do Núcleo de Pesquisas Zootécnicas Sudoeste - Instituto de Zootecnia. Os animais foram examinados entre o 19º e 33º dia de gestação pela ultra-sonografia transretal com exames executados em dias alternados, e do 25º ao 45º dia pelo detector de prenhez para pequenos ruminantes (DPPR-80Ò). O diagnóstico foi considerado positivo pela ultra-sonografia transretal por meio da visualização do saco gestacional e embrião. Após o 25º dia de gestação foi observado também o batimento cardíaco embrionário, cuja freqüência é de 160 a 200 batimentos por minuto. Esta observação foi dada como diagnóstico de gestação. Os nascimentos confirmaram os resultados dos exames. Dentre 88 fêmeas acasaladas, 3 abortaram durante o experimento e foram retiradas do grupo. Das 85 fêmeas restantes, 64 pariram. O diagnóstico de prenhez por meio da ultra-sonografia transretal apresentou 35,29% de acurácia no 19º dia de gestação, culminando em 82,35.00% no 31º dia de gestação. Pelo detector de prenhez, a acurácia foi de 24,71% no 25º dia de gestação e 34,12.00% no 45º dia. Foi possível visualizar os batimentos cardíacos do embrião pela ultra-sonografia transretal à partir do 21º dia de gestação e os primeiros placentomas foram observados ao redor do 25º dia de gestação. A ultra-sonografia transretal mostrou-se um método superior ao detector de prenhez para pequenos ruminantes, para diagnóstico precoce de gestação em ovelhas.
اظهر المزيد [+] اقل [-]Avaliação da infecção experimental por Toxoplasma gondii (Nicolle e Manceuax, 1909) em suínos pelas provas de bioensaio em camundongos e reação em cadeia pela polimerase | Evaluation of experimental Toxoplasma gondii (Nicolle and Manceaux, 1909) infection in pigs by bioassay in mice and polymerase chain reaction
2003
Lucia Eiko Oishi Yai | Manoella Compostrini Barreto Vianna | Rodrigo Martins Soares | Adriana Cortez | Roberta Lemos Freire | Leonardo José Richtznhain | Solange Maria Gennari
O objetivo desse trabalho foi o de padronizar uma técnica de reação em cadeia pela polimerase, nested PCR, para detectar Toxoplasma gondii em tecidos de suínos infectados experimentalmente e comparar os resultados obtidos com a técnica padrão de isolamento, o bioensaio em camundongos Para testar a técnica padronizada, foram inoculados, oralmente, oito suínos com quatro meses de idade, com 5x10(4) oocistos de Toxoplasma gondii (cepa AS-28) e três suínos com a mesma idade, não infectados, foram mantidos como controles. Todos os animais foram sacrificados 47 dias após a infecção e colheu-se amostras de cérebro, coração, língua e retina de cada animal para as provas de bioensaio e PCR. Pela prova de bioensaio foi isolado o parasita quatro dos animais inoculados, sendo dois na retina, um no coração e um na língua. O DNA de Toxoplasma gondii foi detectado em cinco dos suínos inoculados, sendo: em três dos animais na língua, em dois no cérebro e no coração e na retina de um dos animais. O limiar de detecção da nPCR foi de 10 taquizoítas/mL de suspensão de cérebro de camundongos artificialmente contaminada. Nenhuma das técnicas detectou o agente em todos os animais inoculados, entretanto a nPCR, apresentou maior capacidade de detecção e menor tempo para a obtenção do diagnóstico. A utilização das técnicas em associação foi capaz de detectar o agente em sete dos animais inoculados. A única forma de melhorar a sensibilidade do método seria aumentando a quantidade de tecido a ser examinado. | The aim of the present experiment was to standardize a nested polymerase chain reaction (nPCR) for the detection of Toxoplasma gondii in tissues of experimentally infected pigs and to compare the performance of nPCR with the standard isolation technique, the bioassay in mice. Comparison between the two methods was done testing eight 4 month-old pigs orally inoculated with 5 x 10(4) oocysts of Toxoplasma gondii (AS-28 strain) and three non-infected pigs at the same age, kept as control. All animals were euthanatized 47 days after infection and samples of brain, heart, tongue and retina were collected from each animal for analysis by nPCR and bioassay in mice. By using the bioassay, Toxoplasma gondii was detected in 4 infected pigs, being two in the retina, one in the heart and one in the tongue. Toxoplasma gondii DNA was detected in five of the inoculated pigs, being: three in the tongue, two in the brain and heart and one in retina. The detection threshold of the nPCR on mouse brain suspension artificially infected with the RH strain of Toxoplasma gondii was 10 tachyzoites/ml. Although both techniques were unable to detect the parasite in all infected pigs, nPCR showed better performance as it was accomplished in a shorter period of time. When used concurrently, both techniques detected the agent in seven infected animals. The only way to increase sensitivity of either method is to increase the amount of tissue to be examined.
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