Due to the high importance of the venereal transmission of bovine leptospirosis, this study aimed to test the ability of PCR to detect Leptospira interrogans serovar hardjo DNA in experimentally contaminated bovine semen. Employing primers directed to the 16S rRNA gene, 10 bacteria/ml of semen could be detected by PCR. Results achieved in this work show that PCR can have a great potential to detect Leptospira spp. in insemination centers. | Considerando a importância do sêmen na transmissão da leptospira bovina, foi realizado o presente estudo que teve como objetivo aplicar a reação em cadeia pela polimerase (PCR) para a detecção de leptospiras em sêmen bovino experimentalmente contaminado. A reação de PCR foi capaz de amplificar um fragmento de DNA específico de 330 pares de bases a partir de cultivos puros de 26 sorovares de Leptospira spp. A contaminação experimental de sêmen com Leptospira interrogans serovar hardjo revelou que a técnica de PCR conseguiu detectar 10 bactérias/ml, concentração sensivelmente mais baixa que as 1.000 bactérias/ml detectadas através do cultivo microbiológico. Os resultados observados revelam o grande potencial da reação de PCR para a detecção de Leptospira spp. em sêmen bovino, notadamente em centrais de inseminação artificial.

Leptospirosis is a worldwide infection, transmitted between man and animals that causes a decrease in the production of bovine flocks, and offer risks for public health, as an important zoonosis. The rodents are the main reservoirs of leptospires. It was studied 27 dairy farm properties located in or near from Botucatu-SP, Brazil. In these farms were collected blood and kidney samples from rodents, blood and urine samples from bovines and blood samples from the workers. The serology was performed with microscopic agglutination test (MAT). Samples of bovine urine and rodent kidneys were cultivated searching for leptospires isolation. The polymerase chain reaction (PCR) of the kidneys of the rodents was performed. In MAT, 46/140 (32.85%) bovine and 8/34 (23.53%) human sera samples were positive, respectively. In human samples, the serovar Brastilava (37.51%) presented the highest occurrence, while in bovines, the serovars Hardjo and Castellonis were most frequent, with 26.08% each one. All of the rodents were negatives in serology. No leptospire was isolated, and kidney samples were negative in PCR. In bovines, the dam water and the bad hygiene quality of milking process were considered important risks of infection in the affected properties (p<0.05), where other reproductive problems, except abortion, can be related. In other side, to human beings the drainage system was the most important risk factor in the studied properties. Thus, it was verified the necessity of an improvement in zoosanitary handling of the properties, mainly of water supply. | A leptospirose é uma infecção amplamente difundida pelo mundo, transmitida entre o homem e os animais que causa uma queda na produção de rebanhos bovinos, e oferece riscos relacionados à saúde pública sendo uma importante zoonose. Foram estudadas 27 propriedades de pecuária bovina leiteira em Botucatu-SP e limítrofes, com colheitas de amostras de sangue e rim de roedores, sangue e urina de bovinos e sangue dos trabalhadores. A sorologia foi realizada pela soroaglutinação microscópica (SAM). Foi tentado o isolamento de leptospiras por cultura da urina dos bovinos e dos rins dos roedores. Foi realizada a reação em cadeia pela polimerase (PCR) dos rins dos roedores. Para a SAM, 46/140 (32,85%) amostras de soro bovino e 8/34 (23,53%) humana foram positivas, respectivamente. Para as amostras humanas, o sorovar Bratislava (37,51%) apresentou maior ocorrência, enquanto que para os bovinos, os sorovares mais freqüentes foram Hardjo e Castellonis, com 26,08% cada. Todos os roedores foram negativos à sorologia. Nenhuma leptospira foi isolada, e as amostras de rim foram negativas à PCR. Nos bovinos, a água de açudes e as ordenhadas com má qualidade de higiene foram consideradas importantes riscos de infecção nas propriedades acometidas (p<0,05), onde outros problemas reprodutivos, exceto aborto, podem estar relacionados. Por outro lado, para o homem o sistema de drenagem foi o mais importante fator de risco nas propriedades estudadas. Assim, enfatiza-se a necessidade de melhora no manejo zoosanitário das propriedades, principalmente com relação ao suprimento de água.

This study was performed in order to evaluate the detection limit of PCR with fluorescent capillary electrophoresis for Leptospira pomona diagnosis in bovine semen. Negative bovine semen samples were artificially contaminated with Leptospira pomona (10(0) to 10(7) bacteria/ml) and DNA was extracted by phenol/chloroform protocol. DNA fragments visualization was done by three electrophoresis methods: under UV light in 2% agarose gel, silver staining 8% polyacrylamide gel and fluorescent capillary electrophoresis. The detection limit of capillary electrophoresis for Leptospira pomona was 10²bacteria/ml. Under UV light, in 2% agarose gel, the detection limit was of 10(4) bacteria/ml while for silver stained 8% polyacrylamide gel it was 10² bacteria/ml. PCR with fluorescent capillary electrophoresis is an efficient and rapid diagnostic test for DNA detection of Leptospira in bovine semen and this can be an important tool for herd and semen sanitary control in artificial insemination centers. | Este estudo pretendeu avaliar o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Leptospira pomona em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com Leptospira pomona em escalas que variavam de 10(0) a 10(7) bactérias/ml e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. Após a reação de PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em três tipos de eletroforese: agarose 2% sob luz UV, acrilamida 8% corado com prata e eletroforese capilar fluorescente. A detecção de DNA de Leptospira pomona em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 10² bactérias/ml. Nos métodos de eletroforese em agarose 2%, observou-se limite de detecção de 10(4) bactérias/ml e em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 10² bactérias/ml. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa eficaz e rápida na detecção de DNA de Leptospira em sêmen bovino podendo ser uma valiosa ferramenta para controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial dada a facilidade de automação desse processo.

Baypamun® is an immunity modulator recommended as prophylactic and therapeutic use. In the present study, this product was used in the hamsters experimentally infected with Leptospira interrogans serogroup canicola. The animals were divided in 5 groups, with 20 animals each. This product was used as a therapeutic, prophylactic and as adjuvant. As a therapeutic use all the animals died. Despite of eight (40.0%) survivors, the prophylactic use wasn't also totally favorable due to leptospire recovering from kidneys of those animals. Based on the analysis of antibodies levels among animals that received vaccine and vaccine with Baypamun® as adjuvante, this product didn't conferred superior humoral answer. However, other studies should be accomplished utilizing this product in a longer period as well as verify the cellular answer by Baypamun® use as adjuvant in the infectious disease. | Baypamun® é um imunomodulador recomendado na profilaxia e terapêutica de enfermidades. No presente estudo, este produto foi usado em hamsters experimentalmente infectados com Leptospira interrogans, sorogrupo canicola. Estes animais foram divididos em 5 grupos com 20 animais cada. O produto foi usado como terapêutico, profilático e como adjuvante. Quando usado de forma terapêutica, todos os animais vieram a óbito. Quando usado na profilaxia, 8 animais (40%) sobreviveram e foi possível recuperar o agente a partir dos rins desses animais. Baseado na análise do título de anticorpos nos animais que receberam ou não o Baypamun como adjuvante vacinal, o produto não elevou a resposta humoral. Os resultados sugerem, entretanto, outros estudos que utilizem o produto por períodos mais prolongados, além de se verificar a resposta celular para se avaliar o seu efeito como adjuvante nas infecções.

<p>Sera from 922 apparently health equines intended for therapeutic sera production in a farm of the Instituto Butantã in São Roque, State of São Paulo. Brazil, were examined for detection of antibodies to serovars of <em>Leptospira interrogans </em>and to <em>Leptonema illini </em>by the microscopic agglutination (MA) test. Significant antibody titres were found in 807 sera (87.5%) and 659 (81.7%) of those sera reacted to more than one serovar at titres ranging from 1: 100 to 1:6,400 with predominance of low titres (≤ 1:400). From the 23 screening serovars, only tarassovi did not react. The most common reactions among positive sera occurred to antigens from the <em>Icterohaemorrhagiae </em>serogroup (84%) and to <em>Leptonema illini </em>(79.2%).</p> | <p>Soros de 922 eqüinos aparentemente sadios, mantidos na Fazenda do Instituto Butantan (São Roque, SP) para produção de soros hiperimunes, foram analisados quanto à presença de anticorpos para sorovares de <em>Leptospira interrogans </em>e para <em>Leptonema illini, </em>através da reação de aglutinação microscópica (MA). Entre os 807 (87,5%) animais positivos, 659 (81,7%) reagiram com mais de um sorovar, com títulos entre 1:100 e 1:6.400, havendo predomínio de títulos baixos (≤ 1:400); 84% dos soros positivos reagiram com representantes do sorogrupo <em>Icterohaemorrhagiae </em>e 79,2% com <em>Leptonema illini. </em>Dos 23 sorovares utilizados, apenas o <em>tarassovi </em>não reagiu.</p>