<em>Salmonella</em> spp. is one of the major players involved in cases of foodborne diseases in humans and is responsible for significant losses in the poultry industry. The aim of this study was to investigate the presence of <em>Salmonella</em> spp. in feces of commercial turkeys from Brazil. Fecal swabs from 14 turkey farms (pool of six poults/flocks) were collected. The swabs were subject to the conventional bacteriological isolation procedures and to DNA detection of the agent trough PCR. <em>Salmonella</em> spp. was present in a total of nine from 14 turkey farms evaluated. The samples were negative on molecular identification for serovars Enteritidis and Typhimurium. Isolated strains submitted to the reference laboratory for serotyping were identified as <em>S</em>. Agona that has been described as emergent pathogen in several countries. | <em>Salmonella</em> spp. é um dos principais agentes envolvidos em casos de doenças de origem alimentar em humanos, responsável por perdas significativas na avicultura. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de <em>Salmonella</em> spp. em fezes de perus comerciais no Brasil. Foram colhidos suabes fecais de 14 lotes de perus comerciais (<em>pool</em> de seis aves/lote). Os suabes foram submetidos aos procedimentos de isolamento bacteriológico convencionais e a detecção de DNA do agente foi realizada através da técnica de PCR. <em>Salmonella</em> spp. foi detectada em um total de nove lotes dos 14 avaliados. As amostras foram negativas na identificação molecular dos sorovares Enteritidis e Typhimurium. Os isolados foram encaminhados ao laboratório de referência para sorotipagem e identificados como <em>S.</em> Agona; um patógeno considerado emergente em vários países.

O objetivo do presente estudo foi pesquisar a ocorrência de infecção por Leishmania sp. em cães (N = 491) domiciliados no município de Florianópolis, Santa Catarina, considerada uma região indene para leishmaniose visceral até o ano de 2011, quando foram notificados casos autóctones da doença canina. A soroprevalência na população foi avaliada por ELISA (0,4%; 2/491) e RIFI (4,09%; 24/491). Somente um cão apresentou sororeatividade em ambos os métodos sorológicos, totalizando 25 (5,3%) animais sororeagentes. O DNA de Leishmania sp., obtido de uma amostra do sangue total desse animal, foi amplificado por PCR convencional e PCR em Tempo Real. Não foi possível realizar o sequenciamento do DNA amplificado e, deste modo, determinar a espécie de Leishmania envolvida. Os nossos resultados sugerem a necessidade de uma investigação epidemiológica minuciosa em Florianópolis. | The aim of the present study was to investigate the occurrence of Leishmania sp. infection in dogs (N = 491) living in the municipality of Florianópolis, Santa Catarina (SC), Brazil, which was considered a disease-free region for visceral leishmaniasis until 2011, when autochthonous cases of canine disease were notified. Seroprevalence in this population was assessed by ELISA (0.4%; 2/491) and IFAT (4.09%; 24/491). Only one dog exhibited seroreactivity in both serological methods, comprising a total of 25 (5.3%) seroreagent animals. Leishmania sp. DNA, obtained from a sample of whole blood of this animal, was amplified by both conventional and Real-Time PCR. Sequencing of the amplified DNA and, thereby, determination of the Leishmania species involved, was not possible. Our results suggest the necessity of a thorough epidemiological investigation in Florianópolis.

O objetivo do trabalho foi avaliar as condições sanitárias de frango e diversos tipos de lingüiças comercializados na cidade de Botucatu,São Paulo, pela determinação do número mais provável de coliformes a 45ºC/g além da pesquisa de Salmonella pela metodologia tradicional e pela PCR. Foram coletadas 50 amostras de carcaça de frango e 75 de lingüiças frescais, procedentes de nove estabelecimentos diferentes da cidade, no período de abril a novembro de 2006. Das 50 amostras de frango, 35 (70%) estavam fora dos parâmetros microbiológicos, segundo a RDC nº12 da Anvisa (&gt;;10(4) coliformes a 45ºC/g). Embora nessa Resolução, a pesquisa de Salmonella não seja exigida, 4 amostras (8%) apresentaram o patógeno pela metodologia tradicional. Essa presença foi confirmada pela PCR, que também foi positiva para mais 23 amostras, num total de 27 positivas (54%). Dentre as 75 amostras de lingüiças, 30 (40%) estavam fora dos limites permitidos, com 7 amostras positivas para Salmonella, pela metodologia tradicional. Entretanto, se considerar-se a pesquisa pela PCR, o número de amostras positivas aumenta para 42 (56%). Somando-se a taxa de freqüência de Salmonella aos limites microbiológicos para coliformes a 45ºC, 86,7% das lingüiças analisadas estavam impróprias para o consumo. | In the present investigation were evaluated the sanitary conditions of poultry and several types of sausages retailed in Botucatu, São Paulo, Brazil for the determination of the most probable number of coliforms at 45ºC/g besides the research of Salmonella using traditional methodology and PCR. In order to do so, 50 samples of poultry and 75 of sausages were collected from nine different establishments in the city, in the period of April to November of 2006. Of the 50 samples of chicken meat, 35 (70%) were out of the microbiologic parameters, according to Brazilian Sanitary Resolution RDC nº12 of Anvisa (&gt;;10(4) coliforms at 45ºC/g). In this Resolution, the research of Salmonella is not demanded, but 4 samples (8%) presented the pathogen using the traditional methodology. That presence was confirmed by PCR, which was also positive in another 23, in a total of 27 positive samples (54%). Among 75 samples of sausages, 30 (40%) were out of the allowed limits, with 7 positive samples for Salmonella, using traditional methodology. However, if we consider PCR test, the number of positive samples increases to 42 (56%). Adding this number to coliforms microbiological limits, 86.7% of the analyzed sausages were inappropriate for the consumption.

O objetivo do presente estudo foi analisar a aplicabilidade da PCR na detecção de ovinos carreadores de <em>Leptospira</em> em ambiente tropical. Brevemente, dois rebanhos ovinos, previamente reportados como sororeativo (A) e soronegativo (B) foram selecionados para este estudo. Da totalidade de animais de cada rebanho, amostras de urina e fluido vaginal (FV)/sêmen foram colhidas para cultura bacteriológica e PCR. Além disso, amostras de soro foram colhidas e utilizadas na sorologia (teste da soroaglutinação microscópica). Esta técnica confirmou o estado prévio dos dois rebanhos. Nenhuma amostra pura de leptospiras foi obtida no cultivo. Já na PCR, animais do Rebanho A apresentaram 26,7% (FV), 33,3% (sêmen) e 38,9% (urina) de amostras positivas. O Rebanho B apresentou 40,0% (FV), 33,3% (sêmen) e 5,6% (urina) de positividade pela PCR. Em conclusão, a PCR foi uma importante ferramenta na identificação de carreadores de leptospiras, incluindo animais do rebanho soronegativo, o que reforça as vantagens do uso desta técnica para a detecção de ovinos portadores como parte dos programas de controle da leptospirose em ambiente tropical. | The purpose of this study was to analyze the usefulness of PCR for the detection of leptospiral carriers in sheep under tropical field conditions. Two flocks, previously reported as seroreactive (A) and seronegative (B), were selected for this study. From those, the totality of animals of each flock, urine and vaginal fluid (VF)/semen were collected for bacteriological culture and PCR, as well as serum samples for serology. Serology confirmed the previous status of the two flocks. Culture was negative for all the samples. In PCR, animals of Flock A presented 26.7% (VF), 33.3% (semen) and 38.9% (urine) of positivity. Flock B presented 40.0% (VF), 33.3% (semen) and 5.6% (urine) of positivity by PCR. In conclusion, PCR was important to identify carriers of leptospires, including animals from a seronegative flock, what reinforces the advantages of the usage of this tool for the detection of carriers in sheep as part of control programs of leptospirosis under tropical field conditions.<strong></strong>

Durante o período de Outubro de 2004 a Fevereiro de 2006, 75 amostras de sistema nervoso central (SNC) oriundas de eqüinos que morreram com sinais neurológicos no estado de Minas Gerais foram enviadas ao Laboratório de Virologia Comparada no ICB/UFMG para o diagnóstico de herpesvírus eqüino. Essas amostras foram previamente diagnosticadas negativas para o vírus da raiva através dos testes de imunofluorescência direta e inoculação em camundongos, no Laboratório de Saúde Animal (LSA) do Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA). Dentre as amostras analisadas, 39 (52%) foram positivas para o herpesvírus eqüino 1 (EHV-1) através da técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR). Na maioria dos casos, o exame histopatológico do SNC revelou uma discreta vasculite com infiltrado perivascular de células mononucleares, congestão, trombose arterial e degeneração do tecido nervoso central. As amostras de SNC positivas para o EHV-1 foram coletadas de eqüinos oriundos de 30 municípios de Minas Gerais. Os casos de EHV-1 ocorreram de forma isolada não apresentando caráter sazonal. Na maioria dos casos (71,8%), a evolução dos sinais clínicos foi aguda, sendo que os sinais clínicos observados com mais freqüência foram ataxia, instabilidade dos membros posteriores, paralisia dos membros posteriores e decúbito. De acordo com informações relatadas pelo IMA, as infecções causadas pelo EHV-1 foram tão freqüentes como as infecções causadas pelo vírus da raiva em eqüinos no estado de Minas Gerais durante o período estudado. Portanto, torna-se importante a inclusão da encefalite pelo EHV-1 no diagnóstico diferencial de outras doenças do SNC de eqüinos no estado de Minas Gerais. | During the period of October 2004 until February 2006, 75 samples of central nervous system (CNS) obtained from horses that died with neurological signs in the state of Minas Gerais were sent to the Laboratory of Compared Virology in ICB/UFMG for diagnosis of equine herpesviruses. All samples were previously diagnosticated negative for rabies virus by the Laboratório de Saúde Animal of the Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA). Among the analyzed samples, 39 (52%) were positive for the equine herpesvirus 1 (EHV-1) through the polymerase chain reaction assay (PCR). In most cases, the histopathological examination of the CNS revealed a mild vasculitis with perivascular mononuclear cuffing, congestion, arterial thrombosis and degeneration of nervous tissue. The positive CNS samples for EHV-1 were obtained from horses. sampled from 30 municipalities of Minas Gerais state. The cases occurred in an isolated form in different periods of the year, not presenting a seasonal character. The clinical course duration was acute, varying between one and four days. The most frequently observed neurological signs were ataxia, unsteadiness in the hind limb, paralysis of hind limbs and recumbency. According to information provided by IMA, the infections caused by EHV-1 were as frequent as the ones caused by rabies virus in horses of Minas Gerais state during the studied period. Hence, it became important to include EHV-1 encephalitis in the differential diagnosis from other diseases of the central nervous system in horses of Minas Gerais state.

This study was performed in order to evaluate the detection limit of PCR with fluorescent capillary electrophoresis for Leptospira pomona diagnosis in bovine semen. Negative bovine semen samples were artificially contaminated with Leptospira pomona (10(0) to 10(7) bacteria/ml) and DNA was extracted by phenol/chloroform protocol. DNA fragments visualization was done by three electrophoresis methods: under UV light in 2% agarose gel, silver staining 8% polyacrylamide gel and fluorescent capillary electrophoresis. The detection limit of capillary electrophoresis for Leptospira pomona was 10²bacteria/ml. Under UV light, in 2% agarose gel, the detection limit was of 10(4) bacteria/ml while for silver stained 8% polyacrylamide gel it was 10² bacteria/ml. PCR with fluorescent capillary electrophoresis is an efficient and rapid diagnostic test for DNA detection of Leptospira in bovine semen and this can be an important tool for herd and semen sanitary control in artificial insemination centers. | Este estudo pretendeu avaliar o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Leptospira pomona em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com Leptospira pomona em escalas que variavam de 10(0) a 10(7) bactérias/ml e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. Após a reação de PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em três tipos de eletroforese: agarose 2% sob luz UV, acrilamida 8% corado com prata e eletroforese capilar fluorescente. A detecção de DNA de Leptospira pomona em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 10² bactérias/ml. Nos métodos de eletroforese em agarose 2%, observou-se limite de detecção de 10(4) bactérias/ml e em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 10² bactérias/ml. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa eficaz e rápida na detecção de DNA de Leptospira em sêmen bovino podendo ser uma valiosa ferramenta para controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial dada a facilidade de automação desse processo.

Neste trabalho, a técnica de PCR ("polymerase chain reaction") foi utilizada para a sexagem de 92 embriões bovinos fertilizados in vitro. Os embriões originaram-se de fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários de fêmeas bovinas, provenientes de abatedouros comerciais. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados até o estádio de blastocisto. Os embriões foram lavados em solução de PBS, transferidos para tubos de polipropileno contendo água ultrapura, e imediatamente congelados a -196ºC. Os embriões foram descongelados sobre isopor contendo gelo picado e tratados com proteinase K. Para a reação de PCR, utilizaram-se alíquotas de 34 µl de cada tudo, onde foram acrescidos dois pares de primers, seqüência BC1.2 e seqüência satélite 1.715, desoxinucleotídeos, MgCl2, tampão PCR 10X, TaqDNA polimerase e água, em um volume final de 50 µl. As amostras foram amplificadas e a eletroforese realizada em gel de poliacrilamida a 8%. Os géis foram corados com solução de brometo de etídio e analisados em transiluminador de luz ultravioleta. Um índice de 93,47% de amplificação foi atingido, com 41 embriões (47,67%) machos e 45 (52,32%) embriões fêmeas. O uso de gel de poliacrilamida a 8% foi eficaz na separação de fragmentos de DNA muito próximos. | In the present study the polymerase chain reaction (PCR) was used for sexing ninety-two in vitro fertilized bovine embryos. The embryos were obtained after in vitro fertilization of oocytes from slaughterhouses. The oocytes were matured, fertilized, and cultured until the blastocyst stage. The embryos were washed in PBS solution, and transferred to polypropylene tubes with containing ultrapure water and immediately frozen at -196ºC. The embryos were thawed on ice and treated with proteinase K. For the PCR reaction, aliquots of 34 µl from each tube were mixed to the primers BC1.2 and microsatellite sequence 1715, dNTPs, MgCl2, 10X PCR buffer, Taq DNA polymerase and water in a final volume of 50 µl. The samples were amplified and the PCR products separated by electrophoresis in a 8% polyacrylamide gel. The gels were stained in ethidium bromide solution and vizualized under UV-light. The amplification rate was 93.47%, with 41 (47.67%) male embryos and 45 (52.32%) female embryos. The use of 8% polyacrylamide gel was efficient for separating DNA fragments of very similar size.

Objetivou-se com este trabalho detectar o DNA de Brucella spp. em amostras de sangue e de suabe vaginal ou prepucial de 80 cães sorologicamente positivos para brucelose pela prova de imunodifusão em gel de ágar (IDGA), no município de Natal, estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Amostras de sangue total foram colhidas com anticoagulante (citrato de sódio) juntamente com amostras de suabe vaginal e prepucial, para extração de DNA e posterior realização da reação em cadeia da polimerase (PCR) empregando-se os primers ITS66 e ITS279. O DNA de Brucella spp. foi amplificado em seis animais, sendo um animal em ambas as amostras, dois cães em amostras de sangue e três em amostras de suabe do trato reprodutivo. Concluiu-se que a infecção por Brucella spp. está presente em cães no município de Natal, e que a detecção de DNA do agente em amostras de suabe do trato reprodutivo podem ser utilizadas como ferramenta suplementar no diagnóstico de brucelose canina. | The aim of this work was to detect Brucella spp. DNA in samples of blood and vaginal or preputial swabs in 80 seropositive dogs for brucellosis by agar gel immunodiffusion test (AGID) from the county of Natal, Rio Grande do Norte State, Brazil. Whole blood samples were collected with anticoagulant (sodium citrate) and vaginal and preputial swab samples for DNA extraction and polymerase chain reaction (PCR) employing ITS66 and ITS279 primers. Six animals showed amplification of Brucella spp., being one animal in both samples, two dogs only in blood samples, and three only in reproductive tract swabs. It is concluded that infection due to Brucella spp. occurs in dogs from the county of Natal, and the detection of DNA of the agent in reproductive tract swabs may be used as complementary tool in the diagnosis of canine brucellosis.

Este estudo investigou a manifestação do vírus da Anemia Infecciosa das Aves (VAIA) em lotes de frangos que apresentavam retardo no crescimento e aumento da mortalidade observado a partir do quarto dia de idade. Clinicamente, as aves apresentavam depresão, palidez, despigmentação e retardo de crescimento. À necropsia, as aves apresentavam lesões compatíveis com a infecção pelo vírus da Anemia infecciosa das aves (VAIA). Amostras de fígado, baço e timo foram examinadas por PCR que amplifica um frangmento de 675 pb do gene VP-1 do VAIA. Todos os órgãos examinados foram positivos para o vírus da Anemia Infecciosa das Aves. Os demais patógenos, como adenovírus, reovírus, astrovírus, vírus da doença infecciosa bursal e coronavírus aviário não foram detectados pelas diferentes técnicas laboratoriais, como sorologia, PCR ou PAGE. Os resultados mostraram que o vírus da Anemia Infecciosa das Aves (VAIA) pode manifestar-se clinicamente nos primeiros dias de vida dos frangos - um fato ainda não reportado - associado ao vírus vacinal da doença infecciosa bursal (DIB) cepa forte pode induzir um persistente retardo de crescimento, por várias semanas, em frangos. | This survey aimed to investigate chicken anemia virus (CAV) in broilers flocks experimenting retarded growth and increasing mortality since the fourth day of age. Clinically, chickens presented depression, paleness, depigmentation and retarded growth. At necropsy, chickens presented CAV-compatible lesions. Samples from liver, spleen and thymus were tested by PCR for a 675-bp fragment of the CAV VP-1 gene, and all tested samples were positive. Serological and molecular techniques did not detect other pathogens, such as adenovirus, reovirus, astrovirus, infectious bursal disease and avian infectious bronchitis virus. These results showed that chicken anemia virus (CAV) may occur since the first few days of life in broilers - a fact not as yet reported -, associated with high pathogenic Infectious Bursal Disease Virus (IBDV) vaccine strain may induce a persistent growth retarded for several weeks in broilers.

Sete cavalos adultos de status sanitário convencional foram inoculados por via intranasal com a estirpe brasileira A4/72 do herpesvírus eqüino tipo 1 (EHV-1). Nos primeiros dez dias após a inoculação viral, todos os cavalos apresentaram manifestações de infecção respiratória leve e restrita às vias aéreas anteriores. Apesar de possuírem títulos de anticorpos neutralizantes antes da inoculação, alguns cavalos apresentaram soroconversão após o desafio viral. O EHV-1 não foi isolado a partir das secreções nasais e leucócitos sanguíneos periféricos (PBL) de nenhum animal. Entretanto, o DNA viral foi detectado pela reação em cadeia pela polimerase (PCR) nos PBL entre o terceiro e o oitavo dias pós-inoculação (d.p.i.) em todos os animais, indicando a ocorrência de viremia. Além disso, a prova de PCR detectou o vírus nas amostras do lavado broncoalveolar a partir do nono d.p.i. na maioria dos animais. Com base nos resultados obtidos, foi possível concluir que a PCR é uma técnica com alta sensibilidade e especificidade para o diagnóstico do EHV-1, capaz de detectar a presença do DNA viral mesmo quando não ocorre a constatação do agente pelos métodos tradicionais. | Seven conventional adult horses were inoculated intranasally with a Brazilian A4/72 strain of equid herpesvirus-1 (EHV-1). In the first ten days after the inoculation, they showed signs of a mild, self- limiting upper respiratory tract infection. In spite of the presence of neutralizing antibodies before the trial, seroconversion was observed in some horses. The virus was not isolated from nasal swabs and peripheral blood leukocytes (PBL) of any of the horses. However, the EHV-1 was detected through the polymerase chain reaction (PCR) from PBL of all horses in the experiment within the third to the eighth day after the inoculation that illustrated the viremia. In addition, the PCR assay also detected the virus in bronchoalveolar lavage fluid samples starting on the ninth day after the experimental infection in most of horses. For that reason, as a diagnostic tool, the PCR assay showed higher sensitivity and specificity than the conventional laboratorial methods in detection of EHV-1.