A indústria de lã, leite, carne e pele de ovinos tem crescido em importância e novas biotecnologias do sêmen estão sendo estudadas para a elucidação de causas de infertilidade em machos. Sabe-se que danos causados na membrana espermática diminuem a qualidade seminal. Considerando que estas são compostas por uma bicamada de fosfolipídios e que a peroxidação lipídica é causadora de lesão celular, explica-se a importância de estudos sobre os lipídios constituintes do sêmen. A peroxidação lipídica é consequente da reação entre os lipídios e as espécies reativas de oxigênio. Esse quadro pode ser controlado pela presença de antioxidantes no sêmen. O sêmen foi coletado pela técnica da vagina artificial e após análise imediata e mediata, foi separado em duas frações: plasma seminal e pellet de espermatozoide. Seus lipídios foram extraídos por dois métodosbaseados no método Folch, Lesse Stanley modificado diferentes, utilizando clorofórmio e metanol como solventes. Após foram qualificados e quantificados pela especificidade e sensibilidade da Cromatografia Liquida de Alta Eficiência e escolheu-se a melhor extração. A análise estatística dos dados foi realizada através do programa SAS for Windows. O AG saturado predominante no espermatozoide é o mirístico e o AG insaturado predominante é o DHA, em ambas as extrações. No plasma seminal, nos dois métodos, o AG saturado que prevalece é o palmítico e o insaturado é o oleico. Dentre os dois métodos estudados, o que obtivemos melhores resultados na identificação e quantificação dos AG foi a Método 1. | The sheep industry for wool, milk and meat production is of increasing importance and new technologies for assessment of semen are in course for the elucidation of male infertility causes. It is well known that damage to the sperm membrane decreases semen quality. Considering that sperm membranes are composed by a phospholipid bilayer, and that lipid peroxidation is a major cause of cell damage, studieson the lipid components of semen are relevant. Lipid peroxidation is a consequence of the reaction between lipids and reactive oxygen species. This event may be reduced in the presence of antioxidants in semen. Semen was collected with an artificial vagina and, after sperm evaluation, samples were centrifuged to separate the sample into two fractions: seminal plasma and spermatozoa pellet. Both had their lipids extracted by two different methods based on Folch, Less& Stanley method modified, using chloroform e methanol as solvents. After the extraction, some esterified fatty acids were qualified and quantified for the sensitivity and specificity to the high performance liquid chromatography in order to determine the most efficient extraction technique in quantitative and qualitative aspects. Statistical analysis was performed using SAS software for Windows. The predominant saturated fatty acid in sperm under these experimental conditions was the myristic and the most abundant insaturated fatty acid in both extractions was DHA. In seminal plasma, in both methods, the prevailing fatty acid is the saturated palmitic and the unsaturated oleic. Among the methods evaluated, we obtained the best results of identification and quantification of fatty acids in Method 1.

A indústria de lã, leite, carne e pele de ovinos tem crescido em importância e novas biotecnologias do sêmen estão sendo estudadas para a elucidação de causas de infertilidade em machos. Sabe-se que danos causados na membrana espermática diminuem a qualidade seminal. Considerando que estas são compostas por uma bicamada de fosfolipídios e que a peroxidação lipídica é causadora de lesão celular, explica-se a importância de estudos sobre os lipídios constituintes do sêmen. A peroxidação lipídica é consequente da reação entre os lipídios e as espécies reativas de oxigênio. Esse quadro pode ser controlado pela presença de antioxidantes no sêmen. O sêmen foi coletado pela técnica da vagina artificial e após análise imediata e mediata, foi separado em duas frações: plasma seminal e pellet de espermatozoide. Seus lipídios foram extraídos por dois métodosbaseados no método Folch, Lesse Stanley modificado diferentes, utilizando clorofórmio e metanol como solventes. Após foram qualificados e quantificados pela especificidade e sensibilidade da Cromatografia Liquida de Alta Eficiência e escolheu-se a melhor extração. A análise estatística dos dados foi realizada através do programa SAS for Windows. O AG saturado predominante no espermatozoide é o mirístico e o AG insaturado predominante é o DHA, em ambas as extrações. No plasma seminal, nos dois métodos, o AG saturado que prevalece é o palmítico e o insaturado é o oleico. Dentre os dois métodos estudados, o que obtivemos melhores resultados na identificação e quantificação dos AG foi a Método 1.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos do estresse de trabalho sobre a fertilidade de cães machos. Foram utilizados 18 cães da raça rottweiler, férteis, com idade média de 4 anos, distribuídos aleatoriamente em dois grupos: repouso (controle) e trabalho (tratamento). O tratamento era composto por 5 fases: 1-adaptação, 2- adestramento básico, 3-adestramento militar e condicionamento, 4- acampamento, 5-repouso. Durante todo o período experimental, foram feitas duas coletas de sêmen semanais, para avaliação do ejaculado. No final de cada fase foi realizada coleta de sangue para dosagem dos níveis plasmáticos de cortisol. Os dados foram analisados pelo SAS, á=5%. Observou-se efeito negativo do estresse sobre os parâmetros motilidade (72,63 vs. 57,62, p<0,0001) e vigor espermático (3,06 vs. 2,52, p<0,0001), porcentagem de defeitos maiores (16,01 vs. 26,80, p< 0,0001) e totais (29,61 vs. 40,34, p<0,0001). Observou-se interação (p<0,0001) entre tempo e tratamento sobre a variável cortisol, indicando que o tipo de agente estressante (fase) interfere no nível plasmático de cortisol. Com base nesses resultados, é possível concluir que o estresse de trabalho interferiu de maneira negativa na fertilidade dos cães.

Nove amostras de sêmen de dois caprinos adultos, colhidas com a utilização de vagina artificial, foram submetidas a criopreservação, com o objetivo de verificar o efeito do Equex STM Paste e do EDTA, adicionados a um diluidor a base de Tris-gema de ovo, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. Também foi objetivo desse trabalho, avaliar a utilização de um diluidor comercial, a base de lecitina de soja (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, França), para a congelação do sêmen caprino. Assim, foram formados cinco grupos experimentais: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EQUEX+EDTA e Bioexcell. Logo depois da avaliação, o sêmen foi diluído nos diferentes meios e envasado em palhetas de 0,25 mL, com dose inseminante de 100 x 10(6) espermatozóides. As amostras foram submetidas ao resfriamento, com uma curva média de 0,46°C/min, até atingirem a temperatura de 5°C, mantidas por mais 75min em tempo de equilíbrio e, posteriormente, congeladas em nitrogênio líquido. A descongelação foi realizada em banho-maria a 37ºC por 50s. Não houve diferença (P>;0,05) entre as médias de motilidade total e progressiva, em relação aos grupos TRIS, TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA. O grupo Bioexcell obteve o menor (P<0,05) percentual de espermatozóides com motilidade total e progressiva após a descongelação. Após o teste de termoresistência, as melhores (P<0,05) taxas de motilidade total e progressiva foram observadas para os grupos com Equex STM (TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA). Assim, pode-se afirmar que a adição do Equex promove uma maior manutenção das taxas de viabilidade espermática após a descongelação, quando comparado com os diluidores que não o continham.

Objetivou-se avaliar a flora microbiana no sêmen fresco e congelado de reprodutores caprinos, assim como a eficácia dos antibióticos estreptomicina, penicilina e gentamicina, na viabilidade de doses de sêmen congeladas. Foram utilizados 25 reprodutores de diferentes raças, submetidos a duas colheitas de sêmen através do método da vagina artificial, após higiene da região prepucial. A primeira colheita do sêmen foi realizada visando o exame microbiológico e a segunda teve como objetivo proceder a congelação, após diluição em leite desnatado, utilizando penicilina + estreptomicina (A1), gentamicina (A2) ou sem antibiótico (A3). Ao proceder a avaliação microscópica no sêmen fresco, evidenciou-se média de 87,92 ± 7,76% de motilidade individual progressiva (MIP) e 4,96 ± 0,20 de vigor espermático. Em relação à avaliação bacteriana, constatou-se principalmente bactérias do gênero Staphylococcus spp e Bacillus sp. Após a congelação do sêmen, não foram evidenciadas diferenças (P&gt;;0,05) entre os grupos quanto a MIP e vigor espermático. Entretanto, na avaliação microbiológica pós-descongelação, a bactéria do gênero Staphylococcus spp esteve presente na maioria das amostras. Observou-se também que a gentamicina (13,3mg/mL) apresentou melhor atividade anti-microbiana no processo de congelação do sêmen, concluindo-se que pode ser o antibiótico usado na congelação do sêmen de reprodutores caprinos. | The aim of this research was to evaluate the microbial flora in the fresh and frozen semen of goat reproducers, as well as the effectiveness of the antibiotics estreptomicin, penicillin and gentamicin in cryopreservation of semen. It were used 25 males of different breeds, submitted to two semen collect through the artificial vagina method after cleanliness of prepucial region. The first collection of semen aimed the microbiological exam. The second collection had as goal accomplish freezing, after dilution in skimmed milk, with penicillin + estreptomicin (A1), gentamicin (A2) or control (A3). After microscopic evaluation, it was evidenced average of 87.92 ± 7.76% of MIP and 4.96 ± 0.20 of spermatic vigor in fresh semen. Regarding bacterin evaluation, it was verified, mostly, bacteria of the gender Sthaphylococcus spp and Bacillus sp. After semen cryopreservation, it was observed that there wasn't difference (P&gt;;0.05) among groups in MIP and spermatic vigor. However, in the microbiological evaluation of frozen-thawed semen, bacteria of Sthaphylococcus spp gender was present in great part of samples. Gentamicin (13.3mg/mL) promoted larger inhibition of the bacterial growth in the semen post-freezing, concluding that gentamicin can be the antibiotic used for freezing of goat semen.

Os efeitos das enzimas hialuronidase e tripsina foram avaliados quanto à liquefação, motilidade, vigor e integridade do acrossoma, no sêmen de seis macacos pregos (Cebus apella), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo. O sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral, e a fração líquida foi imediatamente avaliada. A fração coagulada do sêmen foi tratada com as enzimas hialuronidase e tripsina, na dose de 1mg/ml, diluídas em meio 199 (Nutricel, Campinas/SP, Brasil), na proporção 1:4 e examinada após 5 e 15 minutos. Test t de Student foi utilizado para comparar os tratamentos. Não houve diferença significativa quanto a motilidade, vigor e integridade de acrossoma (p &gt;; 0.05), entre a fração de sêmen coagulado diluído em hialuronidase e tripsina, após cinco ou quinze minutos. No entanto, houve diferença significativa quanto a motilidade e vigor entre a fração líquida e a coagulada do sêmen (p &lt; 0.05), após quinze minutos. Não houve diferença significativa com relação à integridade de acrossoma (p &gt;; 0.05) entre a fração líquida e coagulada do sêmen, após 15 minutos. De acordo com os resultados, podemos concluir que não houve efeito aparente na fração coagulada do sêmen tratado com as enzimas hialuronidase e tripsina com relação a motilidade, vigor e integridade do acrossoma. No entanto, houve diferença significativa entre a fração líquida e coagulada do sêmen com relação a motilidade e vigor, porém não quanto à integridade do acrossoma. De maneira geral, em ambos os tratamentos, não houve a completa dissolução do coágulo. | The effect of the enzymes hyaluronidase and trypsin were recorded on the motility, vigor and acrosome integrity in the semen of capuchin monkey (Cebus apella). The animals (n=6) were maintained at Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Under anesthesia semen samples were collected by electroejaculation. Immediately after the ejaculation, the semen liquid fraction was analyzed for volume (ml), pH, motility (%), vigor (0-5), concentration (cells/ml), defects (%) and percentage of intact acrosome (%). The coagulated fraction was treated with a solution of hyaluronidase or trypsin, 1mg/ml in commercial medium (199-Nutricel, Campinas/SP, Brazil) in a proportion of 1:4 and the samples were examined after 5 and 15 minutes. The Student T Test (95%) was used to compare the treat-ments. There was no significant difference in the motility, vigor or acrossome integrity (p &gt;; 0.05) between coagulated fraction diluted ei-ther in trypsin or in hyaluronidase, after 5 or 15 minutes. However, there was significant difference in motility and vigor between liquid and coagulated fraction, after 15 minutes, for both treatments (p; 0.05). In conclusion, there were no apparent effects in the coagulum for both treatments regarding motility, vigor and acrosome integrity. There were significant differences between liquid and coagulated fractions regarding motility and vigor, but not for acrosome integrity. In both enzyme treatments there were no complete dissolution of the coagulum.

Os efeitos das enzimas hialuronidase e tripsina foram avaliados quanto à liquefação, motilidade, vigor e integridade do acrossoma, no sêmen de seis macacos pregos (Cebus apella), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo. O sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral, e a fração líquida foi imediatamente avaliada. A fração coagulada do sêmen foi tratada com as enzimas hialuronidase e tripsina, na dose de 1mg/ml, diluídas em meio 199 (Nutricel, Campinas/SP, Brasil), na proporção 1:4 e examinada após 5 e 15 minutos. Test t de Student foi utilizado para comparar os tratamentos. Não houve diferença significativa quanto a motilidade, vigor e integridade de acrossoma (p >; 0.05), entre a fração de sêmen coagulado diluído em hialuronidase e tripsina, após cinco ou quinze minutos. No entanto, houve diferença significativa quanto a motilidade e vigor entre a fração líquida e a coagulada do sêmen (p < 0.05), após quinze minutos. Não houve diferença significativa com relação à integridade de acrossoma (p >; 0.05) entre a fração líquida e coagulada do sêmen, após 15 minutos. De acordo com os resultados, podemos concluir que não houve efeito aparente na fração coagulada do sêmen tratado com as enzimas hialuronidase e tripsina com relação a motilidade, vigor e integridade do acrossoma. No entanto, houve diferença significativa entre a fração líquida e coagulada do sêmen com relação a motilidade e vigor, porém não quanto à integridade do acrossoma. De maneira geral, em ambos os tratamentos, não houve a completa dissolução do coágulo.

Com o objetivo de avaliar a função reprodutiva de 4 cães machos, adultos, a citologia aspirativa com agulha fina (FNAC) e as concentrações de testosterona sérica foram usadas em associação a determinação do volume testicular e análise do sêmen. FNAC foi realizada em ambos os testículos e as concentrações de testosterona foram determinadas durante 24 horas, em intervalos regulares. Os resultados da análise do semen se encontraram dentro do padrão para a espécie nos cães 1 e 3. O cão 2 apresentou testículos pequenos, baixa qualidade seminal, alta porcentagem de células de Sertoli e espermátides iniciais sugerindo uma degeneração testicular. No cão 4 observou-se uma degeneração testicular do lado direito conseqüência de um processo obstrutivo mostrada pela diminuição do testículo, baixa qualidade do sêmen evidenciada pela baixa concentração espermática e incontável número de espermatozóides na FNAC; uma diminuição do trânsito espermático foi observada no testículo esquerdo, com espessamento do epidídimo, alta porcentagem de gotas distais na análise seminal, porém resultados normais na FNAC. O ritmo circadiano da testosteronafoi claro nos cães 3 e 4, entretanto as concentrações encontraram-se próximas ao limite inferior. O volume testicular, a análise do sêmen e a FNAC testicular podem fornecer informações valiosas sobre a espermatogênese. Entretanto, as concentrações séricas de testosterona não são claramente correlacionadas as características reprodutivas nesses cães.

A seleção de galos para a reprodução pelo desenvolvimento da crista vem sendo empregada rotineiramente na avicultura, sendo necessários estudos para verificar a eficiência deste método de seleção. Este trabalho teve por objetivo comparar as características seminais de galos selecionados para a reprodução pelo desenvolvimento da crista. Foram utilizados 65 galos matrizes da linhagem AgRoss, selecionados na 20ª semana de idade e divididos em dois grupos: grupo A, animais sem crista desenvolvida (n=33), e grupo B, animais com crista desenvolvida (n=32). Foram realizadas colheitas semanais de sêmen dos galos de 24 a 71 semanas de idade, para avaliar as características seminais. Foram realizados os testes t de Student e de Wilcoxon para comparar os grupos e análises de perfis para verificar efeitos do grupo, idade e interação grupo x idade. Os valores de volume seminal, concentração espermática, motilidade e vigor foram maiores (p &lt; 0,01) para o grupo B no período de 24-31 semanas de idade. A percentagem de defeitos espermáticos para o grupo A foi maior nos períodos de 24-27 (p &lt; 0,01) e de 32-35 semanas de idade (p &lt; 0,05). O peso corporal foi maior (p &lt; 0,05) para os animais do grupo B no período entre 24-39 semanas de idade e para os galos do grupo A no período de 60-71 semanas de idade. Foram observados efeitos da idade e interação grupo x idade para as características seminais, exceto para vigor. Em conclusão, a observação do desenvolvimento da crista na 20ª semana de idade é um método eficiente na seleção de galos para a reprodução. | The selection of cocks for reproduction by comb development has been employed usually in the aviculture; however, studies have been necessary to establish the efficiency of this method of selection. The objective of this paper was to compare the seminal characteristics in cocks selected to reproduction by comb development. Sixty-five broiler breeder males (AgRoss strain) were selected to breed at 20th week old and divided in two groups, A: birds without comb (n=33) and B: birds with comb (n=32). To evaluate seminal characteristics, semen was collected weekly between 24 to 71 weeks of age. Group means were compared by the Student's t and Wilcoxon tests while profile analysis were performed for to verify effects of group, age, and group x age. Seminal volume, sperm concentration, motility and vigor were greater (p &lt; 0.01) for group B from 24-31 weeks of age. Percentage of sperm morphological defects was greater in group A during 24-27 (p &lt; 0.01) and 32-35 (p &lt; 0.05) weeks of age. Mean body weight was higher for group B between 24-39 weeks of age (p &lt; 0.05) and for group A between 60-71 weeks of age. There were no main effects of group for seminal characteristics or body weight (p &gt;; 0.05), but effects of age (p &lt; 0.001) and group x age interaction were significant (p &lt; 0.05), except for vigor (p &gt;; 0.05). Low or no correlations were observed between seminal characteristics and body weight. In conclusion, the method to select cocks by observation of comb development at 20 weeks of age showed efficient.

The use of frozen semen has become increasingly popular in canine artificial insemination, stimulating research to improve freezing methods and extenders. In this study, was compared the final concentration of 5% ethylene glycol used in 3 equilibration protocols. In Method I, one part of semen was added to two parts of tris-fructose-citric acid with 7.5% ethylene glycol (Extender 2) and frozen without cooling. In Method II, one part of semen was added to two parts of tris-fructose-citric acid with 7.5% ethylene glycol (Extender 2) and cooled at 5ºC for 1 hour before freezing. In Method III, one part of semen was added to one part of tris-fructose-citric without ethylene glycol (Extender 1) and cooled at 5ºC for 1 hour. Just after this period, one part of 5ºC cooled tris-fructose-citric acid containing 15% ethylene glycol (Extender 3) was added to the previous extended semen, maintained at 5ºC for one additional hour and frozen. For freezing in each procedure semen was packaged in 0.5 ml plastic straws and placed for 20 minutes in vapor 5 cm above liquid nitrogen and then lowered into the liquid nitrogen and stored. All samples were thawed by immersion for 30 sec in a 37ºC water bath and immediately evaluated. Progressive motility was best after Method III (63%), which was not different from fresh semen (94%) but was better (p&lt; 0.05) than after Method II (25%) or Method I (6%). Forward velocity was again best after Method III (2.9) comparable to fresh semen (4.6) and Method II (2.5), but better (p&lt; 0.05) than Method I (1.7). Morphological abnormalities were lowest after Method III, but were not significantly different from Methods II or I. Most common abnormalities were detached heads and bent, hairpin and coiled tails. It was concluded that slow, step-wise equilibration in tris-fructose-citrate extender followed by extender with ethylene glycol before freezing seems to produce the best progressive motility and forward velocity in frozen-thawed canine spermatozoa. | A utilização de sêmen congelado tornou-se extremamente comum na prática da inseminação artificial em cães, estimulando a pesquisa de métodos de congelação e diluidores. Neste estudo foram avaliadas as propriedades criopreservativas do etileno glicol na concentração final de 5%, utilizado em 3 diferentes protocolos de congelação. No Método I, uma parte de sêmen foi adicionada a duas partes de tris-frutose-ácido cítrico, contendo 7,5% de etileno glicol e congelado sem prévia refrigeração. No Método II, uma parte de sêmen foi adicionada a duas partes de tris-frutose-ácido cítrico contendo 7,5% de etileno glicol e resfrigerado até 5ºC por 1 hora antes da congelação. No Método III, uma parte de sêmen foi adicionada a uma parte de tris-frutose-ácido cítrico sem etileno glicol e refrigerado até 5ºC por 1 hora, sendo em seguida adicionada uma parte de tris-frutose-ácido cítrico, previamente refrigerado até 5ºC, contendo 15% de etileno glicol, mantido a 5ºC por mais 1 hora e congelado. Para a congelação em cada método, o sêmen foi envasado em palhetas plásticas de 0,5 ml, colocadas em vapor de nitrogênio a 5 cm da coluna líquida por 20 minutos, mergulhadas no nitrogênio líquido e armazenadas. Todas as amostras foram descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos e imediatamente avaliadas. O Método III não apresentou decréscimo significante da motilidade retilínea progressiva após a descongelação e apresentou os melhores resultados para o vigor espermático, comparando-se aos demais métodos. Entretanto, os 3 métodos não apresentaram diferença significativa com relação aos defeitos espermáticos pós-descongelação. Os tipos de defeitos mais freqüentemente encontrados foram cabeça solta normal, cauda dobrada, fortemente dobrada e fortemente enrolada. Foi possível concluir que o tempo de equilíbrio maior no diluidor tris-frutose-ácido cítrico seguido pela diluição em etileno glicol antes da congelação parece produzir para os espermatozóides de cães a melhor motilidade retilínea progressiva e vigor após a descongelação.