Morfo-anatomia e expressão gênica na clonagem de embriões de Elaeis guineensis x E. oleifera.

Portuguese. Hibridação interespecífica de Elaeis guineensis(tipo tenera, oriundo de cruzamento entre os tipos pisiferae dura) e E. oleiferae retrocruzamentos são utilizados com o intuito de obter plantas altamente produtivas, com crescimento lento do estipe, e resistência a doenças como o amarelecimento fatal. Contudo, as progênies obtidas podem apresentar variabilidadeo que dificulta a análise do progressodo melhoramento. A clonagem in vitrode embriões zigóticos pode contribuir para a redução destes efeitos. Resultados experimentais mostraram queduas linhagens decalossubmetidas a diferentes condições apresentaram morfologia “tipicamente embriogênica” e“de exaustão de capacidade embriogênica”. O presente trabalho teve como objetivo analisar anatomia e expressão gênica nestas linhagens e correlacioná-las com a morfologia. Calosdas duas linhagens foram induzidos emembriões zigóticos da progênie RC585, utilizando o meio de cultura Murashige & Skoog(MS), suplementado com 2,4-D a 150 mg.L-1. Após a indução, setores embriogênicos foram transferidos para meio MS suplementado com 8,8 mg.L-1de 2,4-D (meio de multiplicação/maturação). A linhagem 509 foi mantida assim até estocagem a -80oC. A linhagem 511B foi obtida após cultivo emmeio MS suplementado com1 mg.L-1 de 2,4-D e a posterior transferência de estruturas (“ear-like”) embriogênicas isoladas para MS com 10 M de Picloramousem reguladores de crescimento. A morfologia foi examinada em microscópio estereoscópicoea anatomia foi estudadaporinclusão em historesina e cortes seriados em micrótomo. A expressão dos genes SERK(SOMATIC EMBRYOGENESIS RELATED KINASE), DEHYDRINe DEFENSINfoi avaliada nas duas linhagens por reverse transcription-PCR. A identidade dos ampliconsfoi confirmada por sequenciamento.O aspecto morfológico da linhagem 509 levou à sua classificação como tipicamente embriogênica, com presençadecomplexos poli-embrionários. Observou-seembriões maduros, com diferenciação completa da periderme e do pró-câmbio e outros em fase de organização da protoderme. Na linhagem 511B,oscalos eram compactos, com presença de tricomas e raízes. Os tricomas tinham estrutura simples, havia vasos totalmente diferenciados e inclusões de fenol. Esta linhagem, embora inicialmente tenha sido similar à 509,sofria exaustão da capacidade embriogênica,após tentativas de multiplicação e de indução da embriogênese secundária em meio de cultura com concentrações reduzidas de auxina. Foram observados, porém, resquícios de áreas meristemáticas, o que pode ser parte da explicação para a surpreendente semelhança verificada quanto à expressão da SERK: a aquisição da totipotência. Também não foram observadas diferenças quanto à expressão dos genes DEHYDRINe DEFENSIN, resultado interpretado como consequência do estresse imposto pela presença do 2,4-D.