Quantification of stilbene in grapevine leaves by direct fluorometry and high performance liquid chromatography: spatial localisation and time course of synthesis

International audience

English. Aim: This work aimed at studying the spatial distribution of stilbenes in grapevine leaves of different genotypes and to determine their time course of synthesis. These highly fluorescent molecules are considered as the main phytoalexin in grapevine. Methods and results: Two complementary techniques were used to study the synthesis of stilbenes. On the one hand, direct fluorescence of leaves that allowed local evaluation of stilbenes content on 1.6mm2, and, on the other hand, a well known precise and accurate method: high performance liquid chromatography. The latter is time consuming and requires extraction of about 1 cm2 of leaf. This study was performed on different grapevine genotypes cultivated in greenhouse. Conclusion: Stilbenes content measured by HPLC was highly correlated to the specific fluorescence of stilbene. Fluorescence measured on the abaxial side of the same leaf area increased linearly at least during five days after inoculation. Nevertheless, fluorescence intensity varied depending on the leaf studied and stilbenes are not homogeneously distributed on the abaxial side of the leaf. Significance and impact of study: The results showed that in vivo stilbene fluorometry is an efficient, fast and non destructive tool to evaluate stilbene content of grapevine leaf.

French. Objectif : L’objectif de ce travail est d’étudier la distribution spatiale et la cinétique de synthèse des stilbènes dans les feuilles de vigne. Ces molécules fortement fluorescentes sont considérées comme étant les principales phytoalexines de la vigne. Méthodes et résultats : Deux techniques complémentaires ont été utilisées pour étudier la synthèse des stilbènes. D’une part, par l’analyse directe de la fluorescence sur les feuilles ce qui permet une évaluation globale de la teneur en stilbènes sur 1,6 mm2 et d’autre part en chromatographie en phase liquide, méthode précise et fiable. Cette dernière technique est longue et nécessite environ 1 cm2 de feuille. Cette étude a été menée sur différents génotypes de vigne cultivés en serre. Conclusion : Les teneurs en stilbène mesurées en HPLC sont fortement corrélées à la fluorescence spécifique des stilbènes. La fluorescence mesurée sur la même surface abaxiale d’une feuille augmente linéairement durant au moins cinq jours après inoculation. Cependant, l’intensité de la fluorescence varie selon la feuille étudiée et n’est pas distribuée de façon homogène sur la face abaxiale de la feuille. Signification et impact de l'étude : Ces résultats montrent que la mesure de la fluorescence des stilbènes in vivo est une méthode efficace, rapide et non destructive permettant d’évaluer la teneur en stilbène dans les feuilles de vigne.