Proteinases pattern changes in Osmia cornuta I-V instar larvae investigated by zymography [Apoidea]

English. Field rearing of Osmia cornuta is still necessary due to lack of knowledge in nutrition molecular mechanisms. The aim of this investigation was to give a contribute in describing the changes in the expression of the proteinase pattern in order to direct the osmia bee rearing strategy from nest-trapping (NT) and releasing-and-rearing (RR) towards more controlled conditions, such as the laboratory (captivity), whilst optimising their use for crop pollination in both open field and confined environments. I, III, V and mature V instar larvae of Osmia cornuta were sampled from a pedotrophic nest. Proteins were extracted in a native buffer, in order to preserve the proteolytic activity; homogenate was centrifuged and the surnatant was analysed by zymography. Acrylamide gel was precasted with gelatine. After electrophoresis, gel was incubated at 37 deg C for 1 hour in a pH 8 buffer. After incubation, gel was stained with Blue Coomassie. Zymograms show that proteinase pattern changes during larval ontogenesis. In particular, in the I instar, 3 activity bands are well detectable, in the III and V instar 4 bands are detectable, of these 3 are in common, in the V mature instar only one band is detectable. This molecular approach could help in investigating the digestion mechanisms of this solitary bee in order to gain more information to design an artificial diet

Italian. L'allevamento in pieno campo di Osmia cornuta è ancora necessario a causa della mancanza di informazioni sui meccanismi molecolari che regolano la nutrizione di tali apoidei. Lo scopo di questo studio è stato quello di dare un contributo nella descrizione della variazione del pattern proteasico, così da dirottare, in parte, le strategie di allevamento in pieno campo verso quelle di laboratorio. Da celle pedotrofiche prelevate da un nido di Osmia sono stati campionati gli stadi larvali I, III, V e V maturo di O. cornuta. Le proteine delle larve sono state estratte in presenza di un tampone nativo, così da preservare l'eventuale presenza dell'attività enzimatica delle proteasi; l'omogenato così ottenuto è stato centrifugato e il surnatante analizzato mediante elettroforesi per attività. Il gel è stato preparato facendo copolimerizzare l'acrilamide in presenza di gelatina e, dopo la corsa, il gel è stato incubato per 1 ora a pH 8 a 37 gradi C. Infine, il gel è stato colorato con Blue di Coomassie. L'analisi degli zimogrammi rileva che il pattern proteasico varia durante l'ontogenesi larvale; in particolare, nel I stadio larvale sono risultate ben visibili 3 bande di attività proteasica, nel III stadio tali bande sono diventate 4, nel V stadio larvale sono risultate visibili ancora 4 bande di attività, di cui 3 in comune con il terzo stadio, infine nel V stadio larvale maturo è visibile una sola banda di attività. Questo approccio molecolare può dare un contributo allo studio dei meccanismi di digestione di questo apoideo solitario, nell'ottica della messa a punto di una dieta artificiale