Structural and functional analysis of centromeric heterochromatin in sheep

English. We report the isolation and characterization of two satellite DNA families sequences of Ovis aries genome. The amplified DNA sequences were isolated by cloning two of several prominent bands (0.83 Kb Eco RI and 0.6 Kb Pst I), which were visible after run on the agarose gel when digested genomic DNA was stained with ethidium bromide. Both FISH and sequence analysis showed the following evidences: (1) 0.83 Eco RI prominent band corresponds to a satellite sequence centromerically located (satellite I); (2) 0.6 Pst I prominent band corresponds to a pericentromeric satellite (satellite II). PFGE and FISH analysis provided a preliminary evidence about the contiguity of the satellite I and II. The identification of five phage clones from a sheep genomic DNA library in lambda DASH II, containing both satellites, confirmed the contiguity between satellite I and II blocks. We have isolated and sequenced a phage clone containing a junction between discrete blocks of satellite I and satellite II sequences. The junction is characterized by an abrupt juxtaposition of arrays of the two satellites in an inverted orientation with respect to one another. The possibility that the peculiar structural features of this junction could have a functional significance is discussed

Italian. [Riferiamo sull'isolamento e la caratterizzazione delle sequenze di due famiglie di DNA satellite del genoma di Ovis aries. Le sequenze di DNA amplificato sono state isolate clonando due delle bande prominenti (Eco RI da 0.83 Kb e Pst I da 0.6 Kb), che erano visibili in seguito a corsa su gel di agarosio quando il DNA genomico digerito era colorato con etidio bromuro. Sia la FISH, sia l'analisi della sequenza evidenziavano quanto segue: : (1) la banda prominente Eco RI 0.83 corrisponde a sequenze di satelliti localizzate centromericamente (satellite I); (2) la banda prominente Pst I 0.1 corrisponde a un satellite pericentromerico (satellite II). Le analisi PFGE e FISH hanno consentito di evidenziare, in via preliminare, la contiguita' del satellite I e II. L'identificazione di cinque cloni fagici da una biblioteca genomica del DNA ovino in lambda DASH II, contenenti ambedue i satelliti, confermava la contiguita' fra i blocchi del satellite I e II. Abbiamo isolato e studiato la sequenza di un clone fagico contenente una giunzione fra blocchi discreti delle sequenze del satellite I e II. La giunzione e' caratterizzata da una giustapposizione interrotta di due raggruppamenti dei due satelliti in un'orientazione inversa l'una rispetto all'altra. Viene discussa la possibilita' che le caratteristiche strutturali peculiari di questa giunzione possano avere un significato funzionale]