PCR multiplex para a detecção de BSV e CMV em bananeiras micropropagadas

Portuguese. Um protocolo de PCR multiplex foi estabelecido para a detecção do Banana streak virus (BSV) e do Cucumber mosaic virus (CMV) em bananeiras micropropagadas. Estes vírus são responsáveis por perdas na produção de bananas em todo o mundo. Alguns trabalhos descrevem a integração do BSV no genoma B da bananeira. Contudo, a existência de bananeiras híbridas livres do BSV tem sido demonstrada. Ademais, determinadas estirpes do CMV não são transmitidas mecanicamente sob condições de laboratório, nem tampouco detectadas por testes sorológicos. Como conseqüência, a indexação de matrizes para cultura de tecido algumas vezes se mostra ineficiente. A metodologia apresentada neste trabalho sobrepõe esta dificuldade, pois se baseia na detecção do ácido nucléico viral presente em amostras foliares de bananeira. Na reação, foram usados os oligonucleotídeos BADNA 1A e BADNA 4, para a detecção do BSV, e "CMV senso" e "CMV antisenso" para a detecção do CMV. Após a eletroforese foi verificada a presença de dois fragmentos de DNA amplificados simultaneamente, um dos quais com 597 pb correspondente ao BSV e o outro, com 488 pb, correspondente ao CMV. Este resultado indica que o PCR multiplex pode ser utilizado como uma ferramenta adicional na indexação do BSV e do CMV em bananeiras propagadas por cultura de tecido.

English. A protocol for multiplex PCR assay was established to detect both Banana streak virus (BSV) and Cucumber mosaic virus (CMV) in micropropagated banana cultivars. These viruses are responsible for losses in banana production worldwide. Previous reports have described the integration of BSV in banana genome B. However, the existence of hybrid BSV-free banana cultivars has been reported. Moreover, there have been reports that some CMV strains cannot be mechanically transmitted under laboratory conditions and are not always detected by serological assays. Therefore, the selection of virus-free mother plants for tissue culture is sometimes unsuccessful. The methodology presented in this work overcomes this drawback because it is based on the detection of viral nucleic acids in banana leaf samples. Primers BADNA 1A and BADNA 4 were used to BSV detection, and primers "CMV sense" and "CMV antisense" were adopted to CMV detection. The simultaneous amplification of two different sized amplicons was obtained. Following electrophoresis, a 597 pb fragment correlated with BSV and a 488 fragment correlated with CMV were detected. This assay is an additional tool which should be used to confirm the virus-free status of the mother plants propagated through tissue culture.