The effects of L-Ergothioneine and L-Ascorbic Acid on the in vitro maturation (IVM) and embryonic development (IVC) of sheep oocytes | Koyun oositlerinin in vitro maturasyonu (IVM) ve embriyonal gelişimi (IVC) üzerine L-Ergotiyonin ve L-Askorbik Asit'in etkileri

English. The aim of this study was to compare the effects of L-ergothioneine (LE) and L-ascorbic acid (LAA) on the IVM of immature oocytes and embryonic development of in vitro matured oocytes in sheep. The ovaries were collected from slaughterhouse, then they were transferred (within 1-2 hs) to the laboratory at warm (30-35°C) 0.9% saline solution. Cumulus Oocyte Complexes (COCs) were obtained by incision of follicles. Oocytes covered with at least three compact layers of cumulus oophorus cell were in vitro matured in TCM 199 with 10% Foetal Calf Serum (FCS) (v/v), Follicle Stimulating Hormone (FSH), Luteinizing Hormone (LH) and Na Pyruvate with supplemented of 10 mM of LE (Group 1), 10 mM LAA (Group 2) or without any antioxidant (Group 3: Control) at 24 h. COCs with expanded cumulus layers following IVM were transferred to IVF TALP micro-drops with or without antioxidants (LE or LAA). Fresh semen from ram were separated by Percoll-Gradient and capacitated with Hepes TALP with heparine (30 IU/ml). Then, separated and capacitated spermatozoa were transferred to IVF TALP micro-drops containing matured oocytes and incubated for 20 hs. Presumptive zygotes were in vitro cultured in TCM 199 with or without antioxidants (LE or LAA) in 7-8 days. The results showed that, in LE group, the percentages of maturation, 8-cell and morula stages were significantly higher than those of LAA and control groups (p< 0.01-0.05)except for cleavage rate which had a numerically higher (P≥0.05). In conclusion, addition of L-ergothionine into IVM, IVF and IVC medium had a beneficial effect on in vitro maturation of oocytes and embryonic development, especially from cleavage to morula stages compared to LAA and Control groups.

Turkish. Bu çalışmanın amacı koyun oositlerinin in vitro olgunlaştırılması ve olgunlaşmış oositlerin embriyonal gelişimi üzerine L-Ergothiyonin (LE) ve L-askorbik asit (LAA)'in etkilerini karşılaştırmaktı. Mezbahaneden toplanan ovaryumlar % 0.9'luk ılık (30-35°C) fizyolojik tuzlu suda (1-2 saat içerisinde) labaratuvara sevkedildi. Kumulus Oosit Kompleksleri folliküllerin ensizyonu ile elde edildi. Sadece 3 katlı cumulus hücre tabakasına sahip Kumulus Oosit Kompleksleri TCM199 [%10 Fötal Buzağı Serumu (FCS) (v/v), Follikül stimüle edici hormone (FSH), Luteinleştirici Hormon (LH) ve Sodyum Piruvat içeren] içinde 24 saat süreyle in vitro maturasyona (IVM) alındı. IVM ardından, genişlemiş cumulus tabakasına sahip Kumulus Oosit Kompleksleri IVF TALP mikro-droplarına aktarıldı. Koçlardan elde edilen taze sperma Percoll-Gradientle separe edildi ve heparin (30 IU/ml) içeren Hepes TALP ile kapasite edildi. Separe ve kapasite edilen spermatozoonlar, olgunlaşmış ositleri içeren IVF TALP mikro­ droplarına aktarıldı ve 20 saat süreyle inkübe edildi. Olası zigotlar TCM 199'a aktarılarak 7-8 gün in vitro kültüre edildi. Çalışmanın sonuçları, LE eklenmiş grupta, sayısal olarak daha yüksek olan yarıklanma oranı hariç (P≥0.05), 8-hücreli ve morula oranları açısından LAA ve kontrol gruplarından önemli derecede yüksekti (p< 0.01-0.05) Sonuç olarak, IVM, IVF ve IVC medyumlarına LE ilavesinin oositlerin in vitro olgunlaştırılması ve özellikle yarıklanma-morula arası aşamalarda embriyonal gelişim üzerine yararlı etkileri görüldü.