Expression hétérologue de la protéase de paroi PrtH de Lactobacillus helveticus chez Streptococcus thermophilus LMD-9

La croissance en lait de S. thermophilus et Lb. helveticus dépend de leur système protéolytique, notamment de CEP (Cell Envelope Proteinase) qui hydrolysent les caséines en peptides. Lb. helveticus et S. thermophilus présentent respectivement de 0 à 4 CEP (PrtH à PrtH4) et 0 à 1 CEP (PrtS). Connaître leur activité et spécificité de substrat indépendamment permettra d’orienter la protéolyse dans les produit s fermentés selon les souches utilisées. La réalisation de mutants chez Lb. helveticus étant difficile, nous avons choisi d’exprimer de façon hétérologue le gène prtH dans une bactérie lactique naturellement transformable, protéolytique, et qui croît dans les mêmes conditions, S. thermophilus LMD-9. Trois mutants ont été obtenus par remplacement de prtS de LMD-9 : i) PrtS - ( prtS remplacé par ery ), ii) PrtH + (exprimant PrtH avec son propre domaine d’ancrage de type S-Layer) et iii) PrtH + WANS (exprimant PrtH avec l’ancrage de PrtS (motif LPXTG)). En lait, les gènes introduits présentent un niveau d’expression similaire à celui de prtS (RT-PCRq) . Un shaving de la surface des cellules de S. thermophilus et de l’HPLC-MSMS a permis de détecter 18 protéines extracellulaires, dont HtrA et PrtS chez LMD-9 et PrtH chez les mutants PrtH+ et PrtH + WANS. La présence de formes ancrées immatures et ma tures de PrtS suggère une automaturation alors que seule la forme immature de PrtH a été détectée, suggérant cette fois-ci la nécessité d’une maturase, comme c’est le cas pour d’autres protéases. Ces résultats montrent que S. thermophilus est un bon outil pour exprimer et ancrer à la paroi des protéines hétérologues d’intérêt. Nos perspectives concernent aintenant la caractérisation de l’activité et de la spécificité des différentes CEP de Lb. helveticus .