Etude experimentale de l'action pathogene du nematode Neoaplectana carpocapsae weiser; recherches gnotobiologiques chez l'insecte Galleria mellonella L.(1)

Une nouvelle méthode d’obtention d’individus axéniques de Neoaplectana carpocapsae a été mise au point à partir des larves néonates après aseptisation des oeufs. En condition parasitaire dans l’insecte hôte axénique, les larves L1 stériles inoculées se développent jusqu’au stade adulte, mais ne peuvent donner de descendance. En condition saprophyte, l’élevage axénique du nématode a été rendu possible après dépôt de L1 stériles sur un milieu stérile ayant subi une supplémentation bactérienne. Les bactéries, ensemencées sur le milieu destiné aux nématodes, le transforment et produisent une biomasse que l’on inactive ensuite pour offrir aux L1 stériles un substrat bioconverti stérile. Dans ces conditions on obtient un élevage axénique au rendement comparable à l’élevage holoxène. En absence de toute bactérie, les nématodes axéniques ont un effet délétère sur les insectes axéniques (Galleria mellonella) dans un délai de 5 j., ce qui suggère une action toxémique propre au nématode. Cette action explique, dans les conditions naturelles, les septicémies à germes banaux engendrées par le nématode, sans qu’il s’agisse obligatoirement de germes entomopathogènes. En condition parasitaire, dans l’insecte-hôte axénique, si l’on associe aux larves L1 stériles des souches bactériennes, on obtient des nématodes gnotoxéniques qui peuvent se multiplier abondamment. L’action du complexe nématode-bactéries provoque toujours la mortalité des insectes dans un laps de temps plus court (3 j. maximum). Plusieurs souches bactériennes ont été reconnues comme propices à la multiplication ; elles appartiennent aux espèces : Enterobacter agglomerans, Serratia liquefaciens, Pseudomonas fluorescens, Xenorhabdus nematophilus (13 souches sur 72 souches testées). Les L3 issues de ce premier élevage ont été transférables sur d’autres insectes axéniques et donnent des séries gnotoxéniques viables. En condition saprophyte, les combinaisons avec X. nematophilus sont les plus efficaces pour le développement du nématode sur des milieux empiriques utilisés habituellement pour l’élevage de masse du nématode. L’importance de X. nematophilus, espèce sous-dominante dans la microflore de N. carpocapsae, est principalement nutritionnelle

A new method has been developped to obtain axenic animals of Neoaplectana carpocapsae from first instar larvae (L1) after axenization of eggs. This has been used to produce gnotoxenic nematodes. Of the 72 strains of bacteria tested and isolated from N. carpocapsae (American ecotype « DD 136 » and French ecotype « Plougastel ») or other Rhabditida, the 13 efficient strains belonged to the following species : Enterobacter agglonwrans, Serratia liquefaciens, Pseudomonas fluorescens, Xenorhabdus nematophilus. They allowed growth and reproduction of the nematodes after association with the axenic L1 and inoculation into axenic insects of G. mellonella. " Dauer larvae " of the third instar (L3) obtained from this first association were infectious for other axenic insects and gave viable gnotoxenic animals in parasitic conditions (in their hosts). Axenic culture of N. carpocapsae was successful after addition of inactivated bacteria to the sterile medium. Axenic nematodes were lethal for axenic insects (Galleria mellonella) suggesting a toxemic action of nematodes alone without the aid of any bacteria. This is why septicemia occurred under natural conditions even in the absence of entomopathogenic bacteria such as X. nematophilus, S. liquefaciens or P. fluorescens, or some non-entomopathogenic bacteria. X. nematophilus appears to be a sub-dominant species in the microflora of N. carpocapsae. Its role is more important in the nutrition and the reproduction of the nematode than in the pathogenic action of the complex. It is a regulator of dominant bacterial populations in the nematode microflora. Gnotoxenic associations with X. nematophilus are most efficient during saprophytic growth on the sterile diet used for mass propagation of the nematode