Detección por PCR de Guignardia bidwellii, agente causal de la pudrición negra de la vid

Spanish; Castilian. Resumen. Guignardia bidwellii (anamorfo: Phyllosticta ampelicida) es el agente etiológico de la pudrición negra de la vid, enfermedad de importancia económica en Europa y cuarentenaria para México. La identificación del estado anamorfo mediante caracteres morfológicos resulta complicada debido a la similitud entre especies del mismo género, por ejemplo, con el endófito cosmopolita G. endophyllicola (P. capitalensis), por lo que es necesario contar con herramientas de diagnóstico rápidas y específicas. Con este propósito se desarrolló un marcador molecular basado en los polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) en la región ITS del ADNr, donde se diseñaron los oligos Bidwell y Ampel2 que mediante amplificación PCR generan un fragmento de 173 pb específico a G. bidwellii f. euvitis. La validación del método demostró que no hay amplificación cruzada con otros hongos fitopatógenos ni con el genoma de la vid. La técnica fue sensible al detectar hasta 30 pg µL-1 de ADN a partir de cultivos monospóricos y en mezcla con tejido vegetal. Se presenta este procedimiento de diagnóstico como una opción rápida y específica para el monitoreo y detección de G. bidwellii f. euvitis en apoyo a las estrategias de prevención, manejo, cuarentena y erradicación de la enfermedad.

English. Abstract. Guignardia bidwellii (anamorph Phyllosticta ampelicida) is the etiological agent of grape black rot, a disease of economic importance in Europe and a quarantine pest for Mexico. The identification of the anamorphic state by morphological characteristics is complicated, due to the similarity among species of the same genus, for example with the cosmopolitan endophyte G. endophyllicola (P. capitalensis), therefore it is necessary to have quick and specific diagnostic tools. For this purpose, a molecular marker based on single nucleotide polymorphisms (SNP) in the ITS region of the rDNA was developed, where the Bidwell and Ampel2 primers were designed. The PCR amplification generates a fragment of 173 bp, specific to G. bidwellii f. euvitis. The validation of the method showed that there is no cross amplification with closely related phytopathogenic fungi or with the genome of grapevine. The technique was sensitive to detect up to 30 pg μL-1 of DNA from monosporic cultures and in mixture of plant tissue. This diagnostic procedure is presented as a fast and specific option for the monitoring, and detection of G. bidwellii f. euvitis in support of prevention, management, quarantine and eradication strategies of the disease.