ВИДІЛЕННЯ ІНГІБІТОРА ТРИПСИНУ НАСІННЯ ЛЮЦЕРНИ З ДОПОМОГОЮ АФФІННОЇ ХРОМАТОГРАФІЇ | ВЫДЕЛЕНИЕ ИНГИБИТОРА ТРИПСИНА ИЗ СЕМЯН ЛЮЦЕРНЫ С ПОМОЩЬЮ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ | ISOLATION OF ALFALFA SEED TRYPSIN INHIBITOR USING AFFINITY CHROMATOGRAPHY

English. A protein inhibitor of trypsin of the cultivar Eva alfalfa seeds was isolated and characterized. It has significant antiproteolytic activity and is promising for the creation of compositions that are designed to correct nutrition in various conditions, accompanied by increased activation of proteolytic enzymes. The stages of purification of the trypsin inhibitor from alfalfa seeds included: extraction of 0.05 M borate buffer (pH 7.6), fractionation of the protein component of the extract with ammonium sulfate, followed by dialysis of the fraction between 75% and 100% saturation and affinity chromatography on a biospecific sorbent trypsin - sepharose 4B. Calculations showed that from 100 g of alfalfa seeds of the cultivar Eva, 67.14 mg of trypsin inhibitor was obtained, the inhibitory activity of which is 27.6 IU / mg protein. Experimental data show that the obtained inhibitor reduces trypsin activity by 63.05% with a weight ratio of inhibitor: enzyme of 1: 1. It is known from literature that a soybean trypsin inhibitor reduces trypsin activity by 30%. The isolated trypsin inhibitor has significant inhibitory activity, the value of which is higher than the inhibitory activity of the plant trypsin inhibitor from soybeans. Affinity chromatography allowed us to obtain a pure, homogeneous trypsin inhibitor, which has significant antiproteolytic activity, which can be compared with the antiproteolytic activity of known plant trypsin inhibitors. From the obtained experimental data, it follows that both, the obtained inhibitor and the inhibitor, which is part of a commercial preparation, effectively reduce trypsin activity, slightly inhibit chymotrypsin activity, and do not affect α-amylase and protease activity. The above data indicate that the trypsin inhibitor of alfalfa seeds of the cultivar Eva is not a bifunctional inhibitor, since it does not affect the activity of amilolytic enzymes. The isolated inhibitor belongs to proteins with a high degree of hydrophobicity. The composition of amino acids, the side chains of which can take part in the formation of hydrogen bonds, is 25% of the total number of amino acid residues of the alfalfa seed trypsin inhibitor. For STI, this value is 23%.

Russian. Выделен и охарактеризован белковый ингибитор трипсина из семян люцерны сорта Eva. Он обладает значительной антипротеолитической активностью и перспективен для создания композиций, предназначенных для коррекции питания в различных условиях, сопровождающихся повышенной активацией протеолитических ферментов. Этапы очистки ингибитора трипсина из семян люцерны включали: экстракцию 0.05 М боратного буфера (pH 7.6), фракционирование белкового компонента экстракта сульфатом аммония с последующим диализом фракции от 75 % до 100 % насыщения и аффинная хроматография на биоспецифическом сорбенте трипсин-сефароза 4B. Расчеты показали, что из 100 г семян люцерны сорта Ева было получено 67.14 мг ингибитора трипсина, ингибирующая активность которого составляет 27.6 МЕ / мг белка. Экспериментальные данные показывают, что полученный ингибитор снижает активность трипсина на 63.05 % при массовом соотношении ингибитор : фермент 1 : 1. Из полученных экспериментальных данных следует, что как полученный ингибитор, так и ингибитор, входящий в состав коммерческого препарата, эффективно снижают активность трипсина, незначительно подавляют активность химотрипсина и не влияют на активность α-амилазы и протеазы. Приведенные выше данные свидетельствуют о том, что ингибитор трипсина семян люцерны сорта Ева не является бифункциональным ингибитором, поскольку не влияет на активность амилолитических ферментов. Изолированный ингибитор относится к белкам с высокой степенью гидрофобности. Состав аминокислот, боковые цепи которых могут принимать участие в образовании водородных связей, составляет 25 % от общего количества аминокислотных остатков ингибитора трипсина семян люцерны.

Ukrainian. Виділено та охарактеризовано інгібітор білка трипсину сорту насіння люцерни Eva. Він має значну антипротеолітичну активність і є перспективним для створення композицій, призначених для корекції харчування в різних умовах, що супроводжується посиленою активацією протеолітичних ферментів. Етапи очищення інгібітора трипсину з насіння люцерни включали: екстракцію 0.05 М боратного буфера (рН 7.6), фракціонування білкової складової екстракту сульфатом амонію з подальшим діалізом фракції від 75 % до 100% насичення та афінна хроматографія на біоспецифічному сорбенті трипсин – сефароза 4В. Розрахунки показали, що із 100 г насіння люцерни сорту Ева отримано 67.14 мг інгібітора трипсину, інгібуюча активність якого становить 27.6 МО / мг білка. Експериментальні дані показують, що отриманий інгібітор знижує активність трипсину на 63, 05% при ваговому співвідношенні інгібітор : фермент 1 : 1. З отриманих експериментальних даних випливає, що як отриманий інгібітор, так і інгібітор, який входить до складу комерційного препарату, ефективно знижують активність трипсину, дещо пригнічують активність хімотрипсину та не впливають на активність α-амілази та протеази. Наведені вище дані свідчать про те, що інгібітор трипсину насіння люцерни сорту сорту Єва не є біфункціональним інгібітором, оскільки він не впливає на активність амілолітичних ферментів. Ізольований інгібітор належить до білків з високим ступенем гідрофобності. Склад амінокислот, бічні ланцюги яких можуть брати участь у утворенні водневих зв’язків, становить 25 % від загальної кількості амінокислотних залишків інгібітора трипсину насіння люцерни