Efecto del estatus ovárico sobre la producción in vitro de embriones bovinos

Tesis (Maestría en Reproducción Bovina) -- UNC- Facultad de Ciencias Agropecuarias ; Instituto de Reproducción Animal Córdoba, 2018

El objetivo de este estudio fue determinar la influencia de la ciclicidad de la hembra bovina sobre la tasa de recuperación y competencia de ovocitos sometidos a maduración y fertilización in vitro (FIV). Pares de ovarios de cada animal fueron obtenidos de manera individual en un matadero local. Inicialmente fueron clasificados de acuerdo a la presencia de cuerpo lúteo (CL), como provenientes de vacas cíclicas (VC) y en ausencia de CL, como procedentes de vacas no cíclicas (VNC). Posteriormente, para establecer la influencia directa del CL, los ovarios se clasificaron en tres grupos diferentes, ovarios originarios de vacas no cíclicas (NCL), ovarios con presencia de CL (CL+), ovarios provenientes de VC, pero sin presencia de (CL-). En cada una de las clasificaciones propuestas fueron realizados dos experimentos. El primero consistió en recuperar los ovocitos por ovario por grupo experimental, y evaluar la calidad del ovocito. Posteriormente, los ovocitos de calidad 1 y 2 se sometieron a maduración in vitro (MIV). A las 7, 14 y 22 horas, 10 a 15 ovocitos fueron coloreados con tinción de orceina al 2% para evaluar la maduración nuclear. En el segundo experimento, ovocitos de calidad 1 y 2 fueron recuperados de los ovarios y se fertilizaron con espermatozoides de toro Brahman durante 18 horas en FIV. Los zigotos fueron cultivados in vitro (CIV), en co-cultivo con células de cúmulus durante 7 días en condiciones de MIV y FIV. Se evaluó la tasa de clivaje y la tasa de blastocistos el día 4 y 6 del CIV respectivamente. El primer experimento reveló una mayor recuperación de ovocitos de ovarios VNC, recuperando un mayor número de ovocitos por ovario de calidad tipo 1. En la maduración nuclear, los ovocitos de ovarios VC tuvieron una mayor y más avanzada maduración nuclear, no obstante, al evaluar los ovarios en forma individual, los ovocitos recuperados de ovarios CL+, presentaron una baja competencia meiótica. En el segundo experimento, la tasa de clivaje fue mayor en los ovocitos de ovarios VC comparado con VNC, sin embargo, la tasa de blastocisto fue más alta en los embriones producidos a partir de ovocitos recuperados de ovarios VNC. Se concluye para el efecto del CL sobre la recuperación, la calidad y competencia ovocitaria, que los ovocitos provenientes de ovarios con CL tuvieron una competencia ovocitaria inferior en comparación con los ovocitos provenientes de ovarios sin CL, sugiriendo que la presencia del CL en los ovarios afecta la producción in vitro de embriones en la especie bovina.

The aim of the study was to determine the influence of the cyclicity of the bovine female regarding the recovery rate and the oocyte competence in oocytes subjected to maturation and in vitro fertilization (IVF). Cow ovaries were collected at a local slaughterhouse and classified according to the presence of corpus luteum (CL) as cyclic cow (CC) or as non-cyclic cow (NCC) in the absence of CL. To establish the influence of the CL on oocyte quality, the ovaries were classified in CL+, CL- and non-CL (NCL). Two experiments were conducted. The first evaluated oocyte recovery and quality. Afterwards, quality 1 and 2 oocytes were submitted to in vitro maturation (IVM). At 7, 14 and 22 hours, 10 to 15 oocytes were stained with orcein 1% to evaluate nuclear maturation. In the second experiment, quality 1 and 2 oocytes were recovered and fertilized with Brahman bull sperm during 18 hours in IVF. The zygotes were in vitro co-cultured (IVC), during 7 days. Cleavage and blastocyst rate were evaluated at day 4 and 6 of IVC. The first experiment revealed superior oocyte recovery from NCC ovaries, recovering more type-1 oocytes per ovary. In the nuclear maturation, the oocytes from CC ovaries had a greater nuclear maturation, although the oocytes recovered from ovaries with a CL, presented lower meiotic competence. In the second experiment, the cleavage rate was greater in oocytes from CC ovaries than NCC ovaries, however, the blastocyst rate was higher in the embryos from NCC ovaries than CC ovaries. We concluded that, oocytes recovered from ovaries with a CL had inferior oocyte competence than oocytes originated from ovaries without CL, suggesting that the CL could influence oocyte competence and therefore the outcome of in vitro embryo production in bovine species.