Isolamento, enumeração, identificação molecular e avaliação de propriedades probióticas de bactérias ácido-lácticas isoladas de leite de ovelha

Sheep milk, obtained from one of the oldest domestic animals, is unique for its high solids ratio. Its cheese are more famous than the milk itself. Lactic acid bacteria, abundant in milk from several mammals, include most of the probiotic microorganisms, which bring benefits to their consumers when ingested in viable and adequate portions. Few data are available in the literature on the microbiota of ewe milk as well on its possible probiotic features. Therefore, the objective of this work was to identify the species of lactic acid bacteria in milks from Lacaunes, Santa Inês and its breeds and evaluate their in vitro probiotic potential. The identification was made through Sangers 16S rDNA sequencing method. The identified species were Enterococcus faecium (56.25%), E. durans (31.25%) and E. casseliflavus (12.5%). Their probiotic potentialwas evaluated by gastric pH and biliary salt resistance and antimicrobial susceptibility; and antagonism against samples and reference microorganisms. It was observed that 75% of the tested enterococci were resistant to gastric pH (2.0) and 56.25% to 0,3% of oxgall (biliary salts). All the tested enterococci were resistant to ceftazidime, oxaciclin, and streptomycin and sensible to clindamycin, erythromycin, and penicillin. The resistance to ciprofloxacin, gentamicin, tetracycline, and vancomycin varied among the tested species. All the tested enterococci strongly inhibited Escherichia coli and Listeria monocytogenes samples, moderately inhibited E. faecalis and Staphylococcus aureus samples, and didnt inhibit Psedomonas aeruginosa, Salmonella enterica var.Typhimurium samples and also one E. durans sample isolated from the evaluated sheep milk. Four samples of E. faecium, one of E. durans, and one of E. casseliflavus presented the best probiotic potential. However, more studies are needed to prove that these samples dont carry neither virulence genes nor antimicrobial resistance genes, as well as their probable transmission to other microorganisms

O leite de ovelha, obtido de um dos animais domésticos mais antigos do mundo, é diferenciado por seu alto teor de sólidos. Seus produtos derivados, principalmente os queijos, têm maior importância social e econômica que o leite de ovelha em si. As bactérias ácido-lácticas, abundantes no leite de todas as espécies domésticas leiteiras, incluem a maior parte dos microrganismos probióticos, que trazem benefíciosao consumidor quando ingeridos em quantidades adequadas e viáveis. Poucos dados estão disponíveis na literatura sobre a microbiota do leite de ovelha, bem como sobre seu potencial probiótico. Então, o objetivo desse trabalho foi identificar as espécies de bactérias ácido-lácticas no leite de ovelhas das raças Lacaune, Santa Inês e suas mestiças além de avaliar o seu potencial probiótico in vitro. A identificação foi realizadapor técnicas de biologia molecular como o sequenciamento pelo método de Sanger do 16S rDNA. As espécies identificadas foram Enterococcus faecium (56,25%), E. durans (31,25%) e E. casseliflavus (12,5%). Não foi identificada nenhuma outra espécie de bactéria ácido-láctica. O potencial probiótico foi avaliado pelos testes de tolerância ao pH gástrico, tolerância aos sais biliares, sensibilidade aos antimicrobianos e antagonismo entre amostras isoladas e microrganismos indicadores. Observou-se que 75% dos enterococos testados foram tolerantes ao pH gástrico (2.0) e 56,25% a sais biliares (0,3% de oxgall). Todos os enterococos testados foram resistentes aceftazidima, oxacilina e estreptomicina, assim como foram sensíveis a clindamicina, eritromicina e penicilina. Foram observados variados graus de sensibilidade a ciprofloxacino, a gentamicina, tetraciclina e vancomicina. Todos os enterococos testados inibiram fortemente as amostras de Escherichia coli e Listeria monocytogenes testadas, moderadamente as amostras de E. faecalis e Staphylococcus aureus e não inibiram as amostras de Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica var. Typhimurium e uma amostra de E. durans isolada do leite de ovelha. Quatro amostras de E. faecium, uma amostra de E. durans e uma amostra de E. casseliflavus apresentaram melhor potencial probiótico, porém, mais estudos são necessários para avaliar se tais amostras apresentam genes para determinados fatores de virulência epara resistência a antimicrobianos e sua provável transmissão a outrosmicrorganismos