Efeito da adição fracionada de Dimetil formamida e das curvas de congelamento na viabilidade in vitro pós-descongelamento do espermatozoide eqüino.

The aim of this research was to evaluate the efficiency of three times of fractionate addition of 5%, the dimethyl formamide to the half seminal extender modified base INRA 82, and its interaction with the time of balance and the rates of freezing in the criopreservation of equine spermatozoa. Ejaculates of six stallions was used to test three times of addition of the dimethyl formamide; Time 1: addition of the tenth part ofdimethyl formamide to each the one minute in the time of ten minutes; Time 2: addition of the tenth part of dimethyl formamide to each the two minutes in the time of twenty minutes; Time 3: addition of the tenth part of dimethyl formamide to each the three minutes in the time of thirty minutes. Completing the average period of one hour and eight minutes in ambient temperature since the beginning until addition of the crioprotectan all the samples had been cooled until 5°C using one scheme computerized to a rates of cooling 0,25°C/min. 3 different procedures for the freezing had been tested: a) without time of additional balance 5°C and freezing 4cm above of the nitrogen level fifteen minutes, and posterior submersion of the samples in nitrogen liquid; b) with timeof additional balance 5°C of forty five minutes and freezing 4cm above of the nitrogen level fifteen minutes, and posterior submersion of the samples in nitrogen liquid e; c) with time of additional balance 5°C of forty five minutes and freezing computerized to one rates of -10°C/min ties -127°C per fifteen minutes, and posterior submersion of the samples in nitrogen liquid. The thawing was made 52°C per ten seconds, followed ofimmersion in bath-Maria 37°C per thirty seconds. Immediately post thaw the parameters of total motility, motility progressive and spermatic vigor were evaluated under microscopy 400X. The integrity of the plasmatic membrane of the tail was evaluated through the hiposmotic swelling test and the functional and structural sperm membrane integrity were evaluate by the fluorescent dyes, carboxyfluorescein diacetateand propidium iodide respectively. The spermatozoa were also evaluated in the temperature resistance. Was not observed significant difference (P> 0, 05) enters the three times of addition and enters the freezing rates. The results allow concluding that the changes of the time of addition of the crioprotectan of fractionate form and the curve of freezing did not modify the equine spermatic viability evaluated in vitro..

Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência de três tempos de adição fracionada de 5%, da dimetil formamida (DMF) ao meio diluídor base INRA 82 modificado, a sua interação com o tempo de equilíbrio e a curva de congelamento na criopreservação de espermatozóides eqüinos. Um ejaculado de seis garanhões foi utilizado para testar três tempos de adição da dimetil formamida: Tempo 1: adição da décima parte da dimetil formamida a cada minuto no tempo de dez minutos; Tempo 2: adição da décima parte da dimetil formamida à cada dois minutos no tempo de vinte minutos; Tempo 3: adição da décima parte da dimetil formamida a cada três minutos no tempo de trinta minutos. Completando-se o período médio de uma hora e oito minutos em temperatura ambiente desde o início até a adição do crioprotetor todas as amostras foram resfriadas até 5°C utilizando uma máquina computadorizada a uma taxa de 0,25°C/min. Foram testadas três diferentes procedimentos para o congelamento: a) sem tempo de equilíbrio adicional à 5°C e congelamento 4cm acima do nível de nitrogênio líquido por quinze minutos, e posterior submersão das amostras no nitrogênio líquido; b) com tempo de equilíbrio adicional a 5°C de quarenta e cinco minutos e congelamento 4cm acima do nível de nitrogênio líquido por quinze minutos, e posterior submersão dasamostras no nitrogênio liquido; c) com tempo de equilíbrio adicional à 5°C de quarenta e cinco minutos e congelamento computadorizado a uma taxa de -10°C/min ate -127°C por quinze minutos, e posterior submersão das amostras no nitrogênio liquido. O descongelamento foi feito a 52°C por dez segundos, seguidos de imersão em banhomariaa 37°C por trinta segundos. Após o descongelamento foram avaliados os parâmetros de motilidade total, motilidade progressiva e vigor espermático em microscopia óptica, com aumento de 400X. A integridade da membrana plasmática da cauda e da cabeça foi avaliada pelo teste hiposmótico e pela coloração de fluorescência respectivamente. Os espermatozóides foram submetidos ao teste de termoresistência. Não foi observada diferença significativa (P> 0,05) entre os três tempos de adição nem as curvas de congelamento. Os resultados permitem concluir que a mudança do tempo de adição do crioprotetor de forma fracionada e da curva de congelamento não altera a viabilidade espermática eqüina avaliada in vitro.