Padronização de uma PCR para o diagnóstico da leucose enzoótica bovina e sequenciamento parcial do gene ENV

The Enzootic Bovine Leukosis (EBL) is viral disease responsible for the development of lymphosarcomas in cattle. The polymerase chain reaction (PCR) using the primers BLV1 and BLV2, was used with success for amplification and detection of a part of the envelope gene (env) in samples of bovine leucocytes from EBL - seropositive and EBL - seronegative animals. The sensitivity of PCR was determines by the accomplishment of PCR in tubes containing serial dilutions of DNA extracted from a sample isolated from an infected animal. The load of 120 pg of DNA as template for PCR gave positive results. The specificity of PCR was determined by enzymatic restriction with Bam HI and by sequence analysis of three samples. The results obtained with PCR and agar gel-immunodiffusion (AGID) were compared, with 73,8% agreement between the tests.

A Leucose Enzoótica Bovina (LEB) é uma doença de origem viral responsabilizada pelo desenvolvimento de linfossarcomas em bovinos. A reação em cadeia da polimerase (PCR) empregando os iniciadores BLV1 e BLV2, foi utilizada com sucesso para amplificação e detecção de parte do gene do envelope (env) em amostras de leucócitos de bovinos soropositivos e soronegativos para o vírus da LEB. A sensibilidade da PCR foi determinada pela diluição seriada de uma amostra de DNA e realização de PCR, obtendo-se o valor de 120 pg de DNA, como a quantidade mínima para a obtenção de resultados positivos na PCR. A especificidade da PCR foi confirmada por restrição enzimática com Bam HI e pelo sequenciamento de três amostras. Os resultados obtidos com a PCR foram comparados com os da Imunodifusão em gel de agar (IDGA), observando-se uma concordância de 73,8% entre os testes.