Análisis del papel de RDA52 en la estabilidad genómica de C. albicans

Candida albicans es un hongo comensal presente en el 50-70% de la población que bajo determinadas circunstancias, tal como bajada en las defensas, se convierte en un patógeno. Hemos demostrado que la cepa de C. albicans SC5314 y su derivado CAI4 son heterozigóticos para el gen HIS4. Dentro de la ORF HIS4 hemos encontrado 11 SNPs, siete sinónimos y cuatro no sinónimos que definen dos haplotipos. La funcionalidad está determinada por la base presente en el SNP929, de manera que G determina funcionalidad y T determina no funcionalidad debido a la presencia de Gly310 o Val310, respectivamente. Este cambio se encuentra dentro del módulo His4B de la proteína His4, por lo que afectaría a su actividad como fosforibosil-ATP pirofosfatasa. Basándonos en este marcador heterozigótico, hemos investigado la frecuencia de aparición de auxótrofos para la histidina como una medida de frecuencia de pérdida de heterozigosidad en mutantes rad52-¿¿ de C. albicans. El gen RAD52 en C. albicans es absolutamente necesario para los eventos mediados por la recombinación homóloga, y su ausencia produce fuertes defectos en integración homóloga, reparación de DNA y mantenimiento de telómeros. Los mutantes rad52 de C. albicans exhiben una frecuencia media de perdida de heterozigosidad al menos 100 veces mayor que la cepa parental CAI4, siendo la pérdida de cromosoma el evento más común que la origina. Además, mostraron una alta frecuencia de mutación puntual (al menos para la ORF del gen HIS4). Las cepas rad52 His- seleccionadas muestran alta frecuencia de fragmentación de cromosomas que no está relacionada con la adquisición de la auxotrofía. Además, parece que tras la pérdida o rotura de un cromosoma tiene lugar una duplicación del homólogo residual o del homólogo no truncado, respectivamente. Las roturas que originan los cromosomas truncados en estas cepas parecen ser reparadas mediante la adición de telómero de novo. Estos cromosomas truncados se mantienen razonablemente estables a lo largo de varias generaciones.