Otimização de protocolos de extração de RNA em diferentes tecidos de milho | Optimization of RNA extraction protocols using different maize tissues

Five RNA extraction methods were tested (CTAB micro extraction, Concert™ - Invitrogen; Concert™ adapted; TRI Reagent® - Sigma; TRI Reagent® adapted) using two different maize tissues (mesocotyl and root), objectifying to establish an efficient method to extract RNA to be later used in gene expression studies. Concert™ method using the adapted protocol was the most efficient for RNA extraction from both tissues of maize seedlings, originating 2351.35 µg per 100 mg of mesocotyl and 893.75 µg per 100 mg of roots, considering both quantity and quality of the extracted RNA. Thus, samples can be submitted to further steps, like DNAse treatment and cDNA synthesis, for gene expression studies. Results showed that small modifications like change in time and tube positioning during incubation and the use of two extra chloroform washings can improve RNA amount, quality and integrity, from different tissues. These modifications might be used in researches on gene expression.

Neste trabalho, foram testados cinco métodos de extração de RNA (CTAB microextração, Concert™ Invitrogen, Concert™ Adaptado, TRI Reagente® Sigma e TRI Reagente® Adaptado), em dois diferentes tecidos de milho (mesocótilo e raiz), com o objetivo de estabelecer um método eficiente de extração de RNA, visando posteriormente estudos de expressão gênica. Observou-se que o método Concert,utilizando o protocolo adaptado, foi o mais eficiente para a extração de RNA de ambos os tecidos de plântulas de milho, originando 2351,35 µg por 100 mg de tecido para mesocótilo e 893,75 µg por 100 mg de tecido para raiz, considerando tanto a quantidade como a qualidade das amostras, podendo ser submetidas às etapas posteriores de tratamento com DNAse e construção de cDNA para estudos de expressão gênica. Pôde-se observar que pequenas modificações nos protocolos, como, por exemplo, mudança no tempo e na posição dos tubos durante a incubação e o incremento de duas lavagens com clorofórmio, podem melhorar muito tanto a qualidade quanto a quantidade do RNA extraído.