Specific gene amplification as a means to detect Renibacterium salmoninarum [bacterial kidney disease]
1995
Butendieck, B. | Morales, P. | Figueroa, J. | Concha, M. | Leon, G. (Universidad Austral de Chile, Santiago (Chile). Inst. de Bioquimica)
Spanish; Castilian. Las caracteristicas peculiares del agente etiologico de la enfermedad bacteriana del rinon de los salmonidos, Renibacterium salmoninarum, han obstaculizado el desarrollo de metodos especificos y altamente sensibles que permitan detectar bajos niveles del patogeno. En este trabajo se presenta la optimizacion de un procedimiento basado en la reaccion de la polimerasa en cadena (PCR) para la deteccion especifica del genoma de R. salmoninarum. De acuerdo a investigaciones previas realizadas en nuestro laboratorio se aislo un fragmento de 149 pb que se encuentra unicamente en el genoma de este microorganismo. Utilizando los partidores especificos para este fragmento y el DNA genomico purificado de R. salmoninarum, se desarrollo el procedimiento para amplificar selectivamente esta secuencia, detectandose el equivalente a unas 22 celulas bacterianas. En este trabajo se modificaron las condiciones experimentales del ensayo a fin de incrementar la sensibilidad de la reaccion, evitando al mismo tiempo la aparicion de productos de amplificacion inespecificos. Asi, en 35 ciclos de PCR y con DNA puro como templado, la sensibilidad se incremento mas de 40 veces, limite que no presenta ningun metodo de los descritos hasta ahora para la deteccion de R. salmoninarum. Por otra parte, se ensayaron algunos procedimientos de lisis de una suspension de la bacteria a fin de facilitar la liberacion del DNA y dejarlo asequible como templado para la reaccion de amplificacion
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