[Clone obtention of porcine rubulavirus (pruv) from la piedad, michoacan (lpm) and evaluation of different procedures for titration] | Clonacion y evaluacion de diferentes procedimientos para la titulacion del rubulavirus porcino (rvp) de La Piedad, Michoacan (LPM)
1998
Martinez Lara, Atalo C. | Santiago, J. | Coba Ayala, Maria Antonia | Manjarrez M, E. | Correa Giron, Eduardo Pablo | Alvarado, N. (E-mail: [email protected])
Spanish; Castilian. Con el objeto de contar con clonas del RVP/LPM para la produccion de antigeno, para la elaboracion de vacunas, reactivos diagnosticos, etc..., se propago el RVP/LPM (6. pase en PK-15); y se procedio a titular al RVP/LPM clonado, por los metodos clasicos de Hemoaglutinacion (HA), Unidades Formadoras de Placa (UFP) y Dosis Formadoras de Efecto Citopatico (DFEC), y por los metodos alternos de Fijacion del Complemento (FC) y Espectrofotometria (EF). La primera clona se obtuvo inoculando un monoestrato de celulas VERO, en el que se desarrollo una sola placa sincitial a las 48 h, y que a los 7 dias PI presentaba 100% de efecto citopatico (ECP); el fluido sobrenadante se congelo a -196oC, en alicuotas. Con este material se inocularon 100 myl por pozo, con las diluciones logaritmicas (10-1 a 10-7), en monocapas de celulas VERO y PK-15, (en microplacas de 96 pocitos), agregando posteriormente 15myl de metilcelulosa al 0.5%; y a las PK-15, ademas, 2% de suero fetal bovino; incubando a 37oC, con 5% de CO2 (durante 7 dias las VERO y 9 dias las PK-15). Despues se cuantificaron las placas y se cosecharon solo las clonas que crecieron individualmente; y la concentracion de virus se midio por HA, FC, DFEC, UFP y EF. Posteriormente, la poblacion obtenida fue multiplicada en celulas PK-15 (Clona 1) y en VERO (Clona 2). Dos aislados de campo del RVP tambien fueron clonados por este sistema, y se les identifico por inhibicion de la hemoaglutinacion (IH) y por sueroneutralizacion (SN). Las placas sincitiales se desarrollaron mejor en monocapas de celulas VERO. Los titulos mas altos fueron obtenidos por UFP y por DFEC, con resultados similares; mientras que estos fueron variables con la FC; la EF resulto bastante reproducible.
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