[Presence of secretion proteases of Pasteurella haemolytica isolated from bovine and ovine pneumonic cases] | Presencia de proteasas de secrecion de Pasteurella haemolytica aisladas de neumonias en bovinos y ovinos

Spanish; Castilian. Pasteurella haemolytica es uno de los patogenos principales que afectan el tracto respiratorio de los rumiantes. Con respecto a sus mecanismos de patogenicidad, se han documentado varios factores de virulencia, entre los que se encuentran endotoxinas, leucotoxina y polisacaridos capsulares, pero se ha descrito poco sobre la presencia de compuestos con actividad de proteasa secretados por esta bacteria. En otros agentes causantes de enfermedad y en otras especies animales, se ha demostrado la importancia de las proteasas en la produccion de dano a los tejidos. Por lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de compuestos con actividad de proteasa en sobrenadantes de cultivo de diferentes cepas de Pasteurella haemolytica aislada de cuadros neumonicos. Se obtuvieron un total de 19 muestras de pulmon de corderos y una de bovino, que murieron con cuadro clinico de neumonia. Los ovinos pertenecian a explotaciones ubicadas en la zona de influencia de la Facultad de Estudios Superiores Cuautitlan-UNAM, Estado de Mexico; el bovino pertenecia a la misma Facultad. Las muestras fueron procesadas por metodos bacteriologicos convencionales. Los aislamientos de P. haemolytica fueron serotipificados por Hemaglutinacion Indirecta utilizando 16 antisueros de referencia. Adicionalmente se conto con 7 serotipos de referencia para evaluar comparativamente las cepas aisladas de cuadros clinicos. Para la determinacion de las proteasas se obtuvieron por centrifugacion sobrenadantes de cultivos de P. haemolytica a las 6 hrs. de incubacion en medio BHI, de los cuales fueron precipitadas las proteinas con etanol absoluto, resuspendidas en PBS y se realizo un corrimiento electroforetico en geles de poliacrilamida al 10 % copolimerizada con gelatina al 0.1%. Los geles fueron activados y tenidos con azul de Coomassie. Se obtuvieron un total de 6 aislamientos de P. haemolytica, de los cuales 5 eran de origen ovino y 1 de bovino. Los serotipos aislados en ovinos fueron el A1, A8, A9, A12 y A13 y en el bovino el T3. En relacion a la produccion de proteasas de secrecion, se observo que todos los serotipos aislados y los de referencia mostraron en sus sobrenadantes compuestos con actividad de proteasa aunque con diferente intensidad. En la literatura se ha descrito una sialoglicoproteasa de P. haemolytica que hidroliza especificamente sialoglicoproteinas, asi como una neuraminidasa la cual actua sobre acido sialico de glicoproteinas. En el presente trabajo, las proteasas que se determinaron, pueden ser diferentes a la sialoglicoproteasa descrita, debido a que esta tiene un peso molecular de 35 kDa y la actividad de las proteasas observadas correspondian a moleculas de mas de 150 kDa.. Por todo lo anterior se sugiere en estudios posteriores evaluar los sustratos especificos de estos, compuestos para determinar su efecto sobre sistemas biologicos, que pudiesen contribuir a entender mejor la patogenia de la enfermedad causada por P. haemolytica. Proyecto parcialmente financiado por CONACyT: 3903P-B9607.