Fate of T-DNA in tobacco plants co-transformed with two Agrobacterium tumefaciens strains [Nicotiana tabacum L.]
2004
Morreale, G. (Istituto Sperimentale per la Cerealicoltura, Rome (Italy)) | Berio, T. (Istituto Sperimentale per la Cerealicoltura, Rome (Italy)) | Filidei, E. (Istituto Sperimentale per la Cerealicoltura, Rome (Italy)) | Laura, M. (Istituto Sperimentale per la Cerealicoltura, Rome (Italy)) | Allavena, A. (Istituto Sperimentale per la Cerealicoltura, Rome (Italy))
English. Following the European Union Directive 01/18/EC, the presence of marker genes conferring resistance to antibiotics will be no longer allowed in transgenic plants. Two major methods have so far been assessed to obtain marker-free transgenic plants: site-specific recombination, cotransformation and segregation. In this paper we report the fate of T-DNA integrated into tobacco plants following co-cultivation with two Agrobacterium tumefaciens strains each carrying either a selectable marker, the NPTII gene, or a useful gene, the GUS gene. Marker free GUS expressing progenies were identified in one out of six primary transgenic plants. Integration of the transgene into genomic plant DNA was confirmed by AL-PCR and by sequencing genomic DNA/T-DNA junctions. In comparison to site-specific recombination methods, co-transformation permits the identification of transgenic plants without recombination sequences
Show more [+] Less [-]Italian. [In conformità alla Direttiva dell´Unione Europea 01/18/CE, non sarà più permessa la presenza, nelle piante transgeniche, di geni marcatori che conferiscono resistenza agli antibiotici. Finora sono stati valutati due metodi principali per ottenere piante transgeniche senza marcatori: la ricombinazione sito-specifica e la co-trasformazione e segregazione. In questo lavoro riferiamo sul destino del T-DNA integrato in piante di tabacco a seguito della co-coltivazione con due ceppi di Agrobacterium tumefaciens portanti ognuno o un marker selezionabile, il gene NPTII, o un gene utile, il gene GUS. Sono state identificate progenie senza marker che esprimevano il gene GUS in una di sei piante transgeniche primarie. L´integrazione del transgene nel DNA genomico della pianta è stata confermata con la AL-PCR e sequenziando le giunzioni genomiche DNA/T-DNA. Rispetto ai metodi di ricombinazione sito-specifici, la co-trasformazione consente l´identificazione di piante transgeniche senza sequenze ricombinanti.]
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