Rapid and simple detection of Legionella pneumophila in old network potable water by polimerase chain reaction. A comparison with a common microbiologic detection method

English. Legionella pneumophila, the organism that causes Legionnaires´ disease and Pontiac fever, is an ubiquitous bacterium in natural or manmade aqueous environments and requires an intracellular environment of free-living amoebas for its replication; occasionally it may cause nosocomial pneumonia and in immunodepressed people even death. Rapid and accurate detection of legionellae is important both for diagnosis and for identification of contamination points. In order to detect legionellae, a new DNA amplification method was designed and evaluated. The obtained results have been compared with the classic microbiologic detection method results in BGYE agar culture media. The importance of the reduced time-response must be underlined: less than 48 h for a PCR result, compared to 15 days for results in classic microbiology. Legionella spp. was found in old domestic pipelines of potable water, underlining the importance in food contamination. The primers targeting 165 rRNA gene were designed in order to detect a wide range of Legionella species. The AA could specifically detect Legionella species including Legionella pneumophila

Italian. La Legionella pneumophila è un organismo che causa la febbre del legionario e la febbre Pontiac; si tratta di un batterio ubiquitario presente nelle acque e sopravvive anche grazie al saprofitismo con le amebe che sfrutta per la loro replicazione. Un rapido e accurato rilevamento di Legionella spp. risulta molto importante, sia per una diagnosi precoce, sia per il rilevamento in loco dei punti di contaminazione. Allo scopo di rilevare la legionella in modo rapido, abbiamo messo a punto un nuovo metodo di amplificazione del DNA valutandolo e confrontandolo con i dati ottenuti dalla microbiologia classica mediante coltura su terreno selettivo BGYE. Si deve quindi sottolineare l´importanza di questa metodica che, rispetto alla tecnica classica, è dovuta essenzialmente alla brevità nei tempi di risposta, poiché i dati sono stati ottenuti in meno di 48 ore. La presenza di Legionella spp. è stata rilevata in una vecchia rete idrica a uso domestico mal mantenuta. Il disegno degli oligonucleotidi per la reazione di PCR è stato fatto sul gene MIP del genoma di Legionella facente parte del genoma 16 S codificante per rRNA. Grazie a questo metodo è stato possibile rilevare la presenza di Legionella, includendo anche quella di tipo pneumofilo