Hplc mobile phases comparison for carnosine, anserine, L-histidine and 3-methyl-L-histidine detection [animal physiology]

English. This research proposes an high-performance-liquid-chromatography (HPLC) method for a quantitative detection of carnosine, anserine, L-histidine and 3-methyl-L-histidine, with ophthalaldehyde (OPA) post column derivatisation by isocratic elution. For this purpose, some mobile phases were prepared with scalar acetonitrile concentrations. The best mobile phase for a complete separation of all molecules was composed of acetonitrile and 6 mM HCl with 0,48 M NaCl solution (5%:95% v/v). The regression lines, obtained by a range of concentrations between 62.5 and 0.5 ng/20 micronl for all substances, showed a very high value of R**2 ( about 1), indicating a very high sensibility and accuracy (about 100%) of this new mobile phase in isocratic conditions. Temperature increase of post column derivatisation (50 deg C) with OPA showed a greater sensibility for L-histidine and 3-methyl-L-histidine detection (about 70%) and the new mobile phase in isocratic conditions produced a complete separation for all compounds and in particular way between carnosine and 3-methyl-L-histidine. The high sensibility of this method can detect histidine dipeptides and correlated compounds L-histidine and 3-methyl-L-histidine in animal tissues where they can be present in different and very low concentrations. In addition, this very simple and fast method could be used for histidine dipeptides detection in biological compartments were their concentrations could be very low

Italian. Scopo della ricerca è stato quello di determinare la miglior fase mobile che, in condizioni isocratiche e alla temperatura di derivatizzazione post colonna di 50 gradi C, consentisse la separazione dei picchi di carnosina, anserina e dei loro componenti. Partendo da una fase mobile costituita da 20% acetonitrile e 80% di soluzione 6 mM HCl + 0,48 moli/litro di NaCl, sono state preparate fasi mobili con % di acetonitrile a decrescere (15-10-5), fino al raggiungimento della separazione completa dei picchi. La fase mobile che ha permesso la totale separazione delle molecole è stata quella costituita dal 5% di acetonitrile. Le rette di regressione di ciascuna molecola hanno mostrato R**2 di correlazione estremamente elevati (circa 1) per un intervallo di concentrazione compreso tra 62,5 e 0,5 ng/20 micronl, evidenziando una elevata accuratezza (circa 100%) e un aumento della sensibilità per ogni composto, a tutte le concentrazioni utilizzate. Quindi, se l´aumento della temperatura della reazione di derivatizzazione post colonna con o-ftalaldeide (OPA) ha prodotto un forte incremento della sensibilità di rilevazione di questi composti e, in particolar modo, della L-istidina e della 3-metil-L-istidina (circa 70%), l´utilizzazione di una diversa fase mobile ha consentito la separazione di tutti i composti e principalmente la carnosina dalla 3-metil-L-istidina, che in condizioni isocratiche mostrano tempi di ritenzione molto ravvicinati. In conclusione, la possibilità di poter determinare esigue concentrazioni di questi composti con una adeguata sensibilità e un´elevata accuratezza può consentire di rilevarli anche in quei compartimenti dell´organismo dove la loro presenza appare molto ridotta