Short communication. An in vitro approach for ecotoxicity testing of toxic and hazardous wastes | Comunicación corta. Aproximación in vitro en el análisis de ecotoxicidad de residuos tóxicos y peligrosos

Spanish; Castilian. La caracterización de residuos se complica cuando contienen PBTs (sustancias tóxicas persistentes y bioacumulables) y sustancias con baja toxicidad aguda y mucha peligrosidad crónica, impidiendo la evaluación del riesgo ambiental. Este trabajo utiliza la línea celular de trucha RTG-2 para estudiar la sensibilidad de los ensayos in vitro, como herramienta en la evaluación ecotoxicológica de residuos peligrosos. La batería de bioensayos incluye la medida de citotoxicidad mediante el test de rojo neutro (RN), de protección celular mediante la actividad Beta-galactosidasa (Betagal) y la medida de la alteración del citocromo y de las defensas antioxidantes mediante las actividades etoxi resorufin-O-dietilasa (EROD) y glutation S-transferasa (GST) respectivamente. Se ensayaron tres residuos líquidos (A a C) y tres sólidos (1 a 3) representando un amplio rango de muestras. Los valores de EC50 (RN) variaron entre 0,09 mL/100 mL (B) y 2,01 mL/100 mL (2). Se detectaron fenómenos de hormesis (Betagal) a bajas concentraciones en las muestras A (0,03-0,18 mL/100 mL), 1 (0,03-0,29 mL/100 mL) y 2 (0,03-0,29 mL/100 mL). Se detectó aumento de las actividades enzimáticas en las muestras B ((EROD (0,58-4,68 mL/100 mL), Betagal (0,58-4,68 mL/100 mL) y GST (0,14-1,17 mL/100 mL)) y C ((EROD (0,29-4,68 mL/100 mL) y Betagal (2,34-4,68 mL/100 mL)), mientras que con la muestra 3 no se observaron efectos a la concentración más alta (74 mL/100 mL). La propuesta in vitro puede ser un método eficaz, rápido y barato para proporcionar información básica que permita orientar análisis posteriores y evaluar el riesgo de los residuos tóxicos y peligrosos.

English. In waste-characterization, chemicals with a low acute toxicity but with a high long-term hazard such as PBTs (persistent, bioaccumulable, and toxic chemicals) are difficult to identify, leading to an inaccurate assessment of their risk to the environment. This study assesses the sensitivity of in vitro assays with rainbow trout cell line RTG-2 as a tool for the ecotoxicological testing of hazardous wastes using a battery of bioassays, including a neutral red (NR) assay for predicting cytotoxicity, a Beta-galactosidase (Betagal) assay for predicting cellular defence, and two sub-lethal damage assays: ethoxy resorufin-O-deethylase (EROD) and glutathione S-transferase (GST) to check for induction of cytochrome and for alteration of antioxidant defences respectively. Six samples of complex waste, covering a wide range of liquid (A to C) and solid (1 to 3) matrices were tested. The EC50-values (NR) ranged from 0.09 mL/100 mL (B) to 2.01 mL/100 mL (2). A hormesis effect (Betagal) at low concentrations was observed for the A (0.03-0.18 mL/100 mL), 1 (0.03-0.29 mL/100 mL) and 2 (0.03-0.29 mL/100 mL) samples. A dose-dependent stimulation of enzymatic activity was observed for the B ((EROD (0.58-4.68 mL/100 mL), Betagal (0.58-4.68) and GST (0.14-1.17 mL/100 mL)) and C ((EROD (0.29-4.68 mL/100 mL) and Betagal (2.34-4.68)) samples. No effects were observed at the highest concentration tested (74 mL/100 mL) for sample 3. The in vitro approach can be considered to be an efficient, rapid and cost effective screening system to provide basic information on toxic and hazardous waste for further analysis and risk evaluation.