In vitro production cattle embryos by ultrasound-guided Ovum Pick-up (OPU) | Sığırlarda Ovum Pick-up (OPU) tekniği kullanılarak in vitro embriyo üretimi

English. The aim of the study is to investigate possibilities of OPU technique for increasing number of embryo production from cattle breeding. Eight Holstein Freisian heifers that have been never artificial inseminated, between 9-12 months aged and housed in Lalahan Central Livestock Research Institute were used for oocytes donors. A special attachment designed for transvaginal studies, which 7.5 MHz transducer and aspirating needle apparatus have been settled together in the attachment properly, was used for oocytes aspiration from donors. OPU sessions were applied once a week regularly for each donor. The study was divided into two periods. A refreshment season was put between each period for animal resting physiologically. Each donor joint eight sessions per periods then 16 sessions was done totally during this study. Tissue Culture Medium-199 (TCM-199) was used for in vitro maturation of oocytes. Direct washing method with Brackett and Oliphant Medium (BO) was used for in vitro fertilization process. Amino acids added Charles Rosencrans medium were used as in vitro culture. 5 % CO2, over 95 % of humidity and 38.5°C environmental condition was used in the incubator for oocyte maturation, fertilization, and also embryo culture. As a result, the number of embryos and oocytes were low level because the average number of punctured follicles was limited for each heifer. But it is the author's belief that OPU technique can be used to provide oocytes from live donor cows. Proper donors should be selected for OPU sessions and protocols that are known to be the best should be applied for IVP procedures.

Turkish. Bu çalışmanın amacı, sığırlarda birim zamanda elde edilen embriyo sayısını artırmak için OPU yönteminin kullanım imkanlarının araştırılmasıdır. Çalışmada, donör olarak Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsünde barındırılan 9-12 aylık yaştaki, evvelce hiç suni tohumlama yapılmamış sekiz baş Siyah Alaca düve; ultrason rehberliğinde oosit toplamak amacıyla 7.5MHz'lik konveks probun ve aspirasyon iğnesinin birlikte yerleştirildiği sığırlardaki transvaginal çalışmalar için geliştirilmiş olan özel ataçman kullanılmıştır. OPU uygulamaları, her hayvanda iki eşit periyot halinde ve periyotlar arasında fizyolojik dinlenme süreci bırakılmak kaydıyla düzenli olarak her hafta ve toplam 16 kez gerçekleştirilmiştir. Elde edilen oositlerin in vitro maturasyonları için TCM-199 (Tissue Culture Medium-199) mediumu, fertilizasyonları için Brackett ve Oliphant mediumu ile direkt yıkama yöntemi, in vitro kültürleri içinse Charles Rosencrans aminoasitli mediumu kullanılmış bütün süreçlerde, %5CO2, %95'in üzerinde bağıl nem ve 38.5°C sıcaklığa sahip inkubatör kullanılmıştır. Sonuç olarak, düvelerde gözlenen folikül sayılarının düşük olduğu buna bağlı olarak elde edilen oosit sayısının ve elde edilen embriyo sayısının da arzu edilen düzeyde olmadığı görülmüştür. Bu veriler ışığında OPU tekniğinin donörlerden oosit toplanması amacıyla uygulanabileceği ancak embriyo elde edilmesi için gerek donör seçiminin özenli olması gerekse IVP protokollerinin kusursuz uygulanması gerektiği kanısına varılmıştır.