The vitrification of in vitro fertilized on 7 days bovine embryos | Yedi günlük inek embriyolarının vitrifikasyonla dondurulması

English. Vitrification is able to apply practically and it is economical. Aim of the study is investigation of accomplishment of freezing of in vitro embryos by vitrification. 100 good quality bovine in vitro embryos and compacted morula and blastocyst stage were frozen by vitrification method. Oocytes were provided ovaries from slaughtered cows seven days after culture. In thawing straws taken out from liquid nitrogen were hold it in air 5-6 sec. then it in 200C water, until all ice crystal melt. Embryos were transferred 0.5M and 0.25M sucrose solutions respectively for devitrification procedure. Embryos were transferred into m-PBS (with 20% calf serum) for morphological evaluation. TCM-199 + 0.1mM β-Mercaptoethanol + 20 % Calf Serum (CS) composition was used as culture media. For in vitro survival control, embryos were incubated in 5% CO2, at 38.50C and 99% humidity condition for 24-48 hours. 85 embryos intacted ooplasm were obtained from 100 embryos after thawing in Phospate Buffer Solution. The re-expansion and hatching rate of blastocysts were 35%. In vitro produced and vitrified embryos had survived 35% after thawing in culture. As a result, in vitro produced embryos vitrified easily and provide satisfactory level survival.

Turkish. Bu çalışmanın amacı; in-vitro olarak üretilen sığır embriyolarının, uygulaması kolay ve fazla maliyet gerektirmeyen vitrifikasyon metodu ile dondurulma başarısının incelenmesidir. Mezbahada kesilen sığırların ovaryumlarından elde edilen 100 adet in-vitro üretimi iyi kalite kompakt morula ve blastosit safhasındaki sığır embriyosu, kültürlerinin yedinci gününde vitrifikasyon metodu ile dondurulmuştur. Çözündürmede, sıvı azottan çıkarılan payet 5-6 sn havada tutulup 20°C'de suda tamamen çözündükten sonra sırasıyla 0.5M ve 0.25M Sakkaroz solusyonları içerisinde embriyolar devitrifiye (kriyoprotektanların uzaklaştırılması) edilerek, % 20 buzağı serumlu m-PBS (modifiye tampon fosfat) içerisine alınmıştır. Embriyolar canlılıklarının incelenmesi amacıyla; TCM-199 + 0,1mM β-Merkaptoetanol + % 20 Buzağı serumu (CS) içeren mediuma alınarak, % 5 CO2 , %99 bağıl nem ve 38,5°C'deki inkubatörde 24-48 saat inkubasyona tabi tutulmuştur. Çözüm sonrası PBS'e alınan 100 embriyoların, 85'inin intakt ooplazmalı olduğu görülmüştür. Blastosistlerin re-ekspansiyon ve hatch olma oranı %35 bulunmuştur.Buna göre in vitro üretimi embriyoların vitrifikasyonla dondurulup çözündürüldüklerinde %35 canlılık gösterdikleri tespit edilmiştir. İn vitro üretimi embriyoların vitrifikasyon metodu kullanılarak kolaylıkla dondurulabileceği ve bu yöntemin tatminkar düzeyde canlılık sağladığı görülmüştür.