Electroactivation of zebrafish (Danio rerio) eggs | Electroactivación de oocitos de pez cebra (Danio rerio)

Spanish; Castilian. En pez cebra, una vez que los oocitos son descargados del estroma ovárico, su activación inicial por contacto en agua da lugar a divisiones normales únicamente cuando son fertilizados. Cuando no se utiliza semen (inactivado genéticamente o no), las técnicas reproductivas (como transplante nuclear o inyección espermática intracitoplasmática) son ineficientes. En el presente trabajo se desarrollaron tres experimentos de activación oocitaria por estímulos eléctricos: en el primero de ellos, se compararon seis tratamientos de activación (Voltaje x Pulsos: 2,76 x 1; 2,76 x 2; 2,76 x 3 y 5,40 x 1; 5,40 x 2; 5,40 x 3). El grupo 5,4 x 3 mostró los mejores resultados (32% de activación). En el segundo experimento, se evaluó un tratamiento eléctrico de 20 min de duración. El tratamiento consistió en la aplicación de una secuencia de tres estímulos iguales cada 10 min (de 1 ó 3 pulsos de corriente continua y onda cuadrada de 20 micros de duración cada uno y evaluado a dos niveles de voltaje: 2,76 V y 5,4 V). En este trabajo se observó que el número de pulsos afectó negativamente a los oocitos, incrementándose los porcentajes de oocitos dañados y lisados. Además, la combinación de 20 min y 3 pulsos consecutivos de 2,76 V logró diferencias significativas con su grupo control (43% vs 18% oocitos activados, p < 0,05). En el tercer experimento, se observaron efectos negativos como consecuencia del envejecimiento oocitario. En conclusión, el mejor tratamiento de activación para oocitos de pez cebra intactos (no manipulados) fue la secuencia B3. El estímulo de activación eléctrica propuesto sería el único disponible una vez que los oocitos han sido activados por agua.

English. In zebrafish, initial egg activation by water after being discharged from the ovarian stroma is followed by normal cleavages only in inseminated eggs. When sperm (genetically active or not) is not used as activating agent, reproductive techniques (as either nuclear transplant or intracytoplasmic sperm injection are ineff icient. In this work, three experiments of egg activation by electric stimuli were performed: In the first, six activation treatments were compared (Voltage x Pulses: 2.76 x 1; 2.76 x 2; 2.76 x 3 and 5.40 x 1; 5.40 x 2; 5.40 x 3). The group 5.40 x 3 showed the best results (32% activated). In the second experiment, an electrical treatment of 20 min was carried out. It consisted in a sequence of three equal electrical stimuli every 10 min (of 1 or 3 consecutive direct current square pulses for 20 micros each and applied at two voltage levels, 2.76 V or 5.4 V). It was observed that the number of pulses negatively affected the rates of damaged and lysed eggs. Moreover, only the 20 min treatment with the combination of 3 consecutive pulses at 2.76 V showed significant differences with their respective control group (43% vs 18% activated eggs, p < 0.05). In the third experiment, negative effects of egg ageing were observed. In conclusion, the best activation treatment for intact (non manipulated) zebrafish eggs concerns sequence B3. The electro-activation stimulus proposed here would be the only one available once the egg has already been activated by water.