Extracción y cuantificación de taxoides por HPLC en hojas in situ y en callos inducidos in vitro de Taxus globosa Schlecht

Spanish; Castilian. Los taxoides son protoalcaloides diterpénicos polioxigenados presentes en la corteza y hojas de T. globosa. El taxol es una sustancia quimioterapéutica eficaz en el tratamiento del cáncer de seno, pulmón y ovario. Los objetivos de esta investigación fueron: inducir callos a partir de explantes de hojas, optimizar procedimientos para la extracción, identificación y cuantificación de tres taxoides: taxol, cefalomanina y 10-deacetil baccatina a partir de hojas in situ de un vivero forestal y de una línea de callos altamente productores de taxoides. Se inició un cultivo in vitro de callos eficiente, se efectuaron dos extracciones a temperatura ambiente con diferentes solventes. Se describen dos condiciones cromatógraficas (cromatografía en capa fina y cromatografía liquida de alta resolución) empleadas en la caracterización fitoquímica de las hojas y los callos. El porcentaje de inducción de callos con PIC (PVP), PIC + NAA y NAA fue de 90, 70 y 50 %, respectivamente. Los contenidos de taxol y 10-deacetil baccatina en los extractos de callos fueron mayores que el de cefalomanina. Los contenidos de taxoides en los callos fueron superiores a los contenidos en las hojas.

English. Taxoids are poly oxygenated diterpenic protoalkaloids present in the bark and leaves of T. globosa. Taxol is an effective chemotherapeutic agent in the treatment of breast cancer, lung and ovary. The objectives of this research were: to induce callus from explants of leaves, improve protocols for the extraction, identification and quantification of three taxoids: taxol, cephalomannine and 10-deacetyl baccatin from leaves in situ from a nursery and from a callus cell line producing high content of taxoids. It was started and efficient in vitro culture of callus, two extractions methods were performed at room temperature with different solvents. It was analyzed two chromatographic methods: thin layer chromatography and high performance liquid chromatography to do the phytochemical characterization of the leaves and calluses. The percentage of callus induction with picloram and polyvinylpyrrolidone; picloram and naphthaleneacetic acid; and naphthaleneacetic acid was 90, 70 and 50% respectively. The contents of taxol and 10-deacetyl baccatin in extracts of calluses were higher than cephalomannine. Taxoid contents in the calluses were higher than those of the leaves.