Liberation des acides gras par autolyse enzymatique des triglycerides des graines oleoproteagineuses.

French. Les acides gras produits par hydrolyse chimique des lipides des plantes sont des materiaux de base pour l' industrie des biocarburants, des lubrifiants, des plastiques, des detergents et egalement des adjuvants de preparations commerciales d' herbicides. Cependant les procedes actuels de production des acides gras sont hautement polluants et couteux en energie. Dans ce travail on developpe un nouveau procede de production des acides gras mettant en oeuvre des plantes genetiquement modifiees. On a introduit dans le tabac, retenu comme plante modele, une construction genetique comprenant un gene de lipase (de la levure Geotrichum candidum) sous le controle d' un promoteur graine specifique (promoteur AtEm1 d' Arabidopsis thaliana). Ce promoteur devrait permettre l' expression du gene de lipase au niveau de l' axe embryonnaire tandis que les lipides s' accumulent dans les corps lipidiques des cotyledons. Dans ces conditions, les lipides de la graine devraient etre separes de la lipase par une compartimentation tissulaire et ne pas interferer. Apres broyage des graines on peut penser que la mise en contact des lipides et de la lipase conduira a la liberation d' acides gras. Plusieurs transformants ont ete produits par transfert de gene a l' aide d' Agrobacterium tumefaciens, quelques-uns d' entre eux exprimant, comme attendu, la lipase dans leurs graines. Trois clones (2, 19 et 43) presentent une activite lipase significative et ont ete retenus pour des etudes complementaires. Cependant l' activite enzymatique observee est faible et certains clones presentent un defaut de compartimentation entre l' enzyme et les lipides se traduisant par la production d' acides gras dans la graine intacte. Lorsque les graines du clone 43 sont broyees dans un tampon, des acides gras sont produits dans le milieu reactionnel, validant le procede imagine. De nouvelles constructions realisees, soit par optimisation du promoteur AtEm1, soit par la mise en oeuvre de nouveaux promoteurs, sont prevues et seront testees chez le tabac, avant de tenter leur introduction chez les plantes d' interet agronomique telles que le colza et/ou le tournesol. D' autre part, il est necessaire d' optimiser la reaction enzymatique qui pourrait se derouler dans un reacteur multifonction realisant a la fois l' hydrolyse des lipides et l' extraction des acides gras produits.