Validação de radioimunoensaio para quantificação de leptina plasmática bovina | Imunoradioassay validation to plasmatic bovine leptin quantification

Devido à necessidade de compreender melhor as interações entre leptina e reprodução, um RIA específico para a leptina bovina foi validado. Primeiro, um protocolo para produção de anticorpos foi desenvolvido por meio da inoculação de leptina recombinante equina em um coelho, que resultou em 28,05% de ligação máxima (MB) 105 dias após o inicio do protocolo. Os testes de validação verificaram paralelismo entre a curva-padrão e as diluições dos controles alto e baixo (p; 0,2), no entanto, temperaturas acima de 37 °C interferiram negativamente na recuperação da leptina bovina. O uso do tampão de ensaio com ou sem a adição de plasma não apresentou diferenças (p >; 0,3). Esses resultados demonstraram que o anticorpo produzido em coelho contra leptina equina foi capaz de detectar a leptina plasmática bovina, e que o RIA para a quantificação da leptina bovina apresentou características adequadas para o desenvolvimento de um ensaio válido.

Due necessity of better understanding leptin and reproduction relations, a specific radioimmunoassay (RIA) to bovine leptin was validated. First, an antibody production protocol was developed using recombinant equine leptin inoculated in a rabbit, that results in 28,05% of maximum binding (MB) 105 days after the protocol beginning. The tests of validations verified parallelism between standard curve and dilutions of high and low controls (P < 0,01). Antibody against equine leptin showed specificity to bovine leptin (P < 0,01). The recuperation tax of bovine leptin by antibody against recombinant equine leptin was from 98,4 to 101,6% (P < 0, 01). When the samples were stored in ambient temperature or refrigerated to 4 °C, ligation stability was verified (P >; 0,2), however, temperatures above 37 °C impaired the bovine leptin recuperation. The use of assay buffer with or without bovine plasma did not show any difference (P >; 0,3). These results showed that the antibody produced in rabbit against equine leptin were able to detect plasmatic bovine leptin, and that the RIA to bovine leptin quantification had adequate characteristics to the development of a valid assay.