IDENTIFICACIÓN DEL ESTADO FUNCIONAL DE LA MEMBRANA PLASMÁTICA DEL ESPERMATOZOIDE DE GUAJOLOTE NATIVO DURANTE EL PROCESO DE CRIOPRESERVACIÓN

English. Chlortetracycline fluorescence microscopy (CTC) is an efficient and practical method to study plasmatic membrane of mammals’ sperm damage due to cryopreservation. However, this procedure has not been used to evaluate bird sperm. The objective of this study was to evaluate the functional state of plasmatic membrane in turkey sperm during cryopreservation process. It was collected ejaculated of six male in order to make a semen pool, later, the pool was diluted using a commercial extender with glycerol and processed using a slow frozen protocol. Through CTC the plasmatic membrane functional state was evaluated. Thirteen repetition from each stage of cryopreservation process were made: Fresh semen (SF), refrigerated semen (SR) and freeze-thawing semen (SC). The data obtained were sperm average of every 100 spermatozoa counted in each stage. The capacitated spermatozoa significantly increase as the frozen process was carried out, the values for SF, SR and SC treatments were 9.38, 17.92 and 24.16, respectively. Whereas low values of spermatozoa with acrosome reaction in treatments SF and SR were observed in regard to SC: 2.77, 3.85 and 39.38, respectively. CTC technique allowed to determine that freeze induce capacitation and acrosome reaction process.

Spanish; Castilian. La microscopía de fluorescencia con clortetraciclina (CTC), es un método práctico y confiable para estudiar los posibles daños de la membrana plasmática por la congelación en los espermatozoides de mamífero. Sin embargo, este procedimiento no se ha utilizado para evaluar los espermatozoides de aves. El objetivo del trabajo fue, identificar el estado funcional de la membrana plasmática del espermatozoide de guajolote nativo, durante el proceso de criopreservación. Para cumplir con este objetivo se utilizaron 6 machos en edad reproductiva (12 meses de edad), evaluados previamente como aptos para la reproducción. Los machos se colectaron simultáneamente para la formación de un “pool” de semen, el cual se evaluó macroscópicamente (volumen, color e impurezas)

posteriormente se diluyó en un extensor comercial con glicerol (1:4) y se procedió a la evaluación microscópica (motilidad progresiva, viabilidad, concentración y anormalidades morfológicas). Una vez terminado el espermiograma, se evaluó el estado funcional de la membrana plasmática mediante CTC. Ambas evaluaciones se realizaron durante las tres etapas de criopreservación: fresco (SF), refrigerado (SR) y descongelado (SC). Los datos se analizaron a través de un análisis de varianza de una vía y los promedios se compararon empleando la prueba estadística de Tukey. Se utilizó para tal efecto el programa SPSS® versión 16. Los valores para el SF, SR y SC fueron de 9.38, 17.92 y 24.16, respectivamente, mientras que los espermatozoides con reacción acrosomal presentaron valores bajos en el SF y el SR, con respecto al SC, de 2.77, 3.85 y 39.38 respectivamente. La técnica de CTC, permitió determinar que la congelación induce procesos de capacitación y reacción acrosomal. La congelación del semen de guajolote nativo en glicerol, produce un incremento de los espermatozoides con alteraciones en la membrana plasmática y de las anormalidades morfológicas, así como, una marcada disminución de la movilidad (32.53) y de la viabilidad (53.46). Estos resultados indican que conforme trascurre el proceso de congelación, se incrementan las alteraciones en las membranas del espermatozoide. Sin embargo, se logró conservar un promedio de 60.7 espermatozoides con capacidad fecundante después de la congelación.