Indication of toxigenic Escherihia coli using Ciliates | Индикация токсигенных Escheriсhia coli с помощью инфузорий

Russian. Изучена возможность использования инфузорий с целью биотестирования токсигенных Escheriсhia coli, вызывающих диарею у молодняка крупного рогатого скота и свиней. Было испытано 4 вида инфузорий - Paramecium caudatum, Stylonychia mytilus, Colpoda steinii и Tetrahymena pyriformis. Инфузорий выращивали на среде Лозина-Лозинского. Эшерихии инкубировали в бульоне Хоттингера. На предметное стекло наносили 3 капли суточной среды культивирования инфузорий, после чего проводили подсчет их количества под увеличением 2х8, после чего добавляли 1 каплю бульонной тест-культуры E.coli. Спустя 5 минут производили предварительный, а через 2 ч окончательный просмотр и подсчет количества живых инфузорий. Установлено, что инфузории видов Paramecium caudatum, Colpoda steinii и Tetrahymena pyriformis не пригодны для тестирования токсигенных свойств эшерихий так как первые 2 не погибают при добавлении культуры патогенной E.coli, а 3-й вид напротив весьма чувствителен и погибает даже при добавлении стерильного бульона Хоттингера. Специфически чувствительным к экзотоксинам эшерихий оказался только вид Stylonychia mytilus. В наибольшей степени на стилонихии оказывают губительное влияние цито-токсины (STX, СNF) эшерихий, обуславливая гибель данных инфузорий при 2-часовой экспозиции с суточной культурой в количестве 22-47%. Под действием цитотонинов (TL, TS, GEM) эшерихий стилонихии погибали в меньшем количестве - 7-21%. Использование метода биотестирования на стилонихиях позволило установить, что накопление экзотоксинов в среде культивирования происходит в течение 6-7 дней. Однако культивирование энтеротоксигенных эшерихий более 6 дней приводит к инактивации TL-, TS-токсинов. Таким образом, индикацию токсигенных E.coli среди клинических изолятов можно осуществлять методом биотестирования с использованием инфузорий Stylonychia mytilus, которые высоко чувствительны не только к цитотоксинам, но и цитотонинам возбудителя эшерихиоза.

English. There has been studied a usability of infusoria for the purpose of biotesting toxigenic Escheriсhia coli causing diarrhea in young cattle and pigs. Infusoria of 4 types - Paramecium caudatum, Stylonychia mytilus, Colpoda steinii and Tetrahymena pyriformis were tested. Infusoria were cultivated on a Lozina-Lozinsky medium. Escherichia were incubated in a Hottinger's broth. Onto a glass slide 3 drops of a daily cultivation medium were applied 3 drops of a day infusorian cultivation medium following by counting their number under amplification of 2 x 8, after which 1 drop of a broth test culture was added. A preliminary examination and accounting were carried out after 5 minutes, the final examination and accounting of alive infusoria was after 2 h. it has been established the infusoria of Paramecium caudatum, Colpoda steinii and Tetrahymena pyriformis are not suitable for testing toxigenic properties of Escherichia, as the first 2 do not die when added with a culture of pathogenic E. coli, but the 3-d type, on contrary, is rather sensitive and dies even when adding a sterile Hottinger's broth. Only Stylonychia mytilus appeared to be specifically sensitive to Escherichia exotoxins. (STX, SNF) Escherichia cytotoxins have the most toxic effect on Stylonychia causing the death of these infusoria under 2-hour exposition with a day culture in an amount of 22-47%. Under effect of cytotonins of Escherichia (TL, TS, GEM) died in a less amount – 7-21%. The use opf the biotesting method for Stylonychia allowed finding out that the accumulation of exotoxins in a cultivation medium happens for 6-7 days. However, cultivating enterotoxigenic Escherichia for more than 6 days results in inactivation of TL-, TS-toxins. Thus, indication of toxigenic E. coli among clinical isolates can be carried out by biotesting using infusoria Stylonychia mytilus that are high sensitive not only to cytotoxins, but also to cytotonins causing colibacillosis.