Development of dot-ELISA for the screening rapid diagnosis of Chlamydial infection in sheep | Разработка дот-иммуноанализа для скрининговой экспресс-диагностики хламидиоза овец

Russian. Разработан экспериментальный вариант дот-иммуноанализа (ДИА) для экспресс-диагностики хламидиоза (ХЛ) овец на основе моноспецифических Ig, меченых наночастицами золота. Ig получали на мышах линии BALB/c иммунизированных орнитозным антигеном в комплексе с адъювантом полиоксидонием. Затем Ig конъюгировали с наночастицами золота и конструировали комплекс, обозначенный как Ig-Au40. Используя коллекцию клинических образцов (ОБ) от овец из неблагополучного и благополучного по ХЛ хозяйств, серии Ig были тестированы на специфичность в ДИА: осуществлен выбор нитроцеллюлозных мембран как носителя, подобраны условия термофиксации ОБ на носителе, оптимизирована интенсивность цветного сигнала, снижено фоновое окрашивание. Апробация экспериментального варианта ДИА на положительных и отрицательных ОБ от овец (n=285) параллельно с методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) и реакции длительного связывания комплемента (РДСК) показала, что метод ДИА по чувствительности и специфичности сопоставим с ПЦР. Более того, при параллельном бактериологическом исследовании положительных в ДИА ОБ выявлены типичные хламидийные включения, а методом РДСК подтверждено наличие в этих ОБ специфических антител. Т.о., разработанный вариант ДИА обладает высокой диагностической эффективностью и является перспективным лабораторным методом экспресс-диагностики хламидиоза овец.

English. An experimental variant of dot-immunoassay (DIA) for instant diagnosis of ovine chlamydiosis based on monospecific Ig labeled with gold nanoparticles. Ig were produced on BALB/s mice immunized by Chlamidia psittaci antigen in combination with a polyoxidonium adjuvant. Then Ig were conjugated with gold nanoparticles, and a complex was designed designated as Ig-Au40. Using a collection of clinical samples of sheep from chlamydiosis-affected and chlamydiosis-free farms Ig-series were tested for specificity in DIA: a choice of nitrocellulose membranes as a carrier was carried out, the conditions of thermo-fixation of the samples on the carrier were selected, the intensity of the color signal was optimized, and background staining was reduced. The approbation of the DIA experimental variant on positive and negative samples from sheep (n=285) in parallel with the methods of polymerase chain reaction (PCR) and prolonged complement fixation test (PCFT) has shown that the DIA method in sensitivity and specificity is comparable with PCR. So the more, a parallel bacteriological research of DIA positive samples have revealed typical chlamydial inclusions and the PCFT method has confirmed the presence of specific antibodies in these samples. Thus, the developed DIA variant has a high diagnostic efficiency and is a promising laboratory method of instant diagnosis of ovine chlamydiosis.