Разработка иммунохроматографической тест-системы для экспресс-диагностики хламидиоза овец | Development of immunochromatography test strip for rapid diagnosis of ovine enzootic abortion

Russian. Целью настоящей работы было конструирование экспериментальной иммунохроматографической тест-системы (ИХТ) на основе сингенных и ксеногенных иммуноглобулинов для экспресс-диагностики хламидиоза у овец. Кроличьи поликлональные хламидийные антитела (АТ) были использованы в качестве первичных иммобилизованных АТ для тестовой линии, а мышиные моноспецифические хламидийные АТ, меченные коллоидным золотом с диаметром 40 ± 5 нм, - как вторичные АТ. Экспериментальный вариант разработанной ИТХ включал следующие необходимые компоненты и этапы: (I) Hi Flow Plus 90 - аналитическую мембрану; (II) фиксацию тестовых и контрольных АТ в течение 24 ч при комнатной температуре; (III) блокировку свободных сайтов аналитического мембраны 0,5% лактальбумином в фосфатно-солевом буфере, pH 7.2; (IV) специальную "подушечку" для конъюгата для фиксации хламидийных АТ с наночастицами золота; (V) введение оригинального тест-буфера на этапе подготовки образца для эффективного лизиса эпителиальных клеток, инфицированных хламидиями, с целью обеспечения доступа конкретных антигенов возбудителя хламидиоза для взаимодействия с хламидийными АТ. Реакцию учитывали по наличию на тестовой мембране одной окрашенной линии (отрицательный результат) или двух цветных полос (положительный результат). Экспериментальный вариант ИХТ был апробирован на клинических образцах от абортировавших овец с подтвержденным диагнозом хламидийной инфекции урогенитального тракта. ИХТ показал 100% совпадение с бактериоскопией и коммерческой ПЦР как по положительным, так и по отрицательным ответам. Реакция визуализировалась не позднее 15 мин от момента нанесения тестируемого клинического образца. Таким образом, ИХТ для экспресс-диагностики хламидиоза овец позволяет быстро и точно выявлять возбудитель заболевания непосредственно в местах их содержания без необходимости доставки клинических образцов в лабораторию. Основным преимуществом анализа является простота учета результатов.

English. The immunochromatography test based on the use of two different types of antibodies, such as syngeneic and xenogenic immunoglobulins, is developed. A rabbit polyclonal Chlamydial antibody (Ab) was used as a primary immobilized Ab for the test line (test Ab). A mouse monospecific Chlamydial Ab labeled with colloidal gold nanoparticles served as the secondary Ab. For this purpose, gold nanoparticles with average diameter of 40±5 nm were obtained by chemical synthesis. The experimental modifications of the immunochromatography test developed by us were the following: (i) Hi Flow Plus 90 as an analytical membrane; (ii) fixation of both the test Ab and control anti-mouse immunoglobulins for 24 hours at room temperature; (iii) blocking free sites of the analytical membrane with 0.5 % lactalbumin in PBS; (iv) Conjugate release matrix as the conjugate pad for fixing of the conjugate of Chlamydial Ab with gold nanoparticles; and (v) introduction of the original test-buffer at the stage of sample preparation for effective lysis of the epithelial cells infected with Chlamydia to provide the access of specific Chlamydial antigens for interaction with the Chlamydial Ab. The immunochromatography test developed has been assessed and validated on a limited number of clinical samples from the aborting ewes with confirmed clinical and laboratory diagnosis of EAE. The test showed 100% correlation with both positive and negative responses in comparison with microscopy and commercial PCR. This experimental test for the rapid diagnosis of zoonotic Chlamydia infection in sheep is very promising for rapid and accurately detection of the disease directly on-site of a sheep farm without the need for delivery of clinical samples to the well-equipped regional laboratory.