Optimization method differential immunoperoxidase coloring typical and modified forms of mycobacterium tuberculosis

Разработана дифференцирующая иммунопероксидазная окраска типичных и некислотоустойчивых микобактерий с измененной клеточной стенкой, включающая инактивацию эндогенной пероксидазы, обработку конъюгатом пероксидазы и аффинно-очищенных антител к M.bovis, инкубацию с диаминобензидином и докраску по Kinyoun, которая обеспечивает рубиново-красное окрашивание типичных микобактерий, коричневое - измененных некислотоустойчивых микобактерий, синее - немикобактериачьной микрофлоры и клеток тканей. Оптимальным методом фиксации мазков крови, тканей и микроорганизмов, а также инактивации эндогенной пероксидазы для дифференцирующей иммунопероксидазной окраски оказалась 20-ти мин. обработка смесью этанол-эфир 3% перекись водорода разрушала основную массу клеток. Обработка мазков после иммуноперокисдазного окрашивания соляно-кислым спиртом не уменьшает интенсивность коричневой окраски ДАБ клеток микобактерий и даже повышает специфичность метода за счет снижения неспецифического окрашивания клеток нетуберкулезной микрофлоры. ДИП окрашивание, включающее инактивацию эндогенной пероксидазы, обработку конъюгатом пероксидазы и аффинно-очищенных антител к антигенам M.bovis, инкубацию с субстратным раствором диаминобензидина, окраску карболовым фуксином, обесцвечивание солянокислым спиртом и докраску метиленовым синим обеспечивает рубиново-красное окрашивание типичных микобактерий, коричневое (с оттенками) - измененных некислотоустойчивых микобактерий, синее - немикобактериальной микрофлоры и клеток тканей.

Russian. cells - in dark blue. Fixation (20 min) of smears of blood and microflora by mixture (1:1) ethanol-ether was the better method decrease activity endogenous peroxidases. Treatment of smears after immunnoperoxidase staining by salino-acid spiritus does not decrease the intensity of the brown color DAB of mycobacterial cells and even increases the specificity of the method by decreasing the non-specific staining of non-tuberculous microflora cells. DIP staining, wich included endogenous peroxidase inactivation, treatment by peroxidase conjugate and affinity purified antibodies to antigens M.bovis, incubation with a diaminobenzidine substrate solution, carbol fuchsin coloration, discoloration alcohol and hydrochloric acid are stained with methylene blue provides ruby red coloration of typical mycobacteria, brown (from shades) - modified acid-fast bacilli, blue – not mycobacterial microflora and tissue cells.

English. In a course of the research there was developed differential immunnoperoxidase staining of acid fast and cell wall deficient mycobacteria including inactivation endogenous peroxidases, incubation with conjugate of peroxidase with affinity purified antibody to M. bovis, diaminobezedene and restainig by Kinyoun. Acid fast mycobacteria stained in ruby-red color, cell wall deficient - in brown, not mycobacterial microflora and tissues&#039