Method for obtaining cattle embryos by simulated systems of in vitro fertilization

English. The method for obtaining early embryos of bovine animals outside the body was developed, including the isolation of oocytes from the ovaries of the rejected cows, their maturation to the stage metaphase 2 in the cultural medium on a monolayer of epithelial cells of the oviduct previously obtained for 7 days at an initial concentration of 0,9 × 10,6 cells per milliliter of medium, fertilization by the frozen-thawed sperm of the bull which has undergone capitation procedure, and cultivation of fertilized oocytes on a monolayer of endometrial cells of the uterus, received through 24-30 days after sowing of 2,2-4,0×106 cells per milliliter of medium before reception of preimplantation embryos within 10 days in a nutrient medium under a layer of mineral oil in СО2-incubator at temperature 38,0oC, the maximum humidity of 98 % and the content of 5 % СО2 in air. Use of simulated systems of obtaining preimplantation cattle embryos in vitro allows to increase efficiency of oocytes obtained from culled breeding highly productive cows, and increase the yield of morul-blastocysts by 17,2% compared to the control by using monolayer cultures of somatic cells of reproductive organs (epithelial oviduct and uterus endometria cells), providing saturation of the medium for embryos cultivation by biologically active substances synthesized by somatic cells.

Russian. Разработан способ получения ранних эмбрионов крупного рогатого скота вне организма, включающий выделение ооцитов из яичников выбракованных коров, их дозревание до стадии метафаза 2 в культуральной среде на предварительно полученном в течение 7 суток монослое эпителиальных клеток яйцевода при первоначальной концентрации 0,9×106 клеток на миллилитр среды, оплодотворение заморожено-оттаянной спермой быка, прошедшей процедуру капацитации, и культивирование оплодотворенных ооцитов на монослое клеток эндометрия матки, полученном через 24-30 дней после посева 2,2-4,0×106 клеток на миллилитр среды до получения преимплантационных эмбрионов в течение 10 дней в питательной среде под слоем минерального масла в СО2-инкубаторе при температуре 38oС, максимальной влажности 98% и содержании 5% СО2 в воздухе. Использование моделируемых систем получения преимплантационных эмбрионов крупного рогатого скота вне организма позволяет повысить эффективность использования ооцитов, полученных от выбракованных высокопродуктивных племенных коров, и увеличить выход морул-бластоцист на 17,2% по сравнению с контролем за счет использования монослойных культур соматических клеток репродуктивных органов (эпителиальных клеток яйцевода и эндометрия матки), обеспечивающих насыщение питательной среды для культивирования зародышей биологически активными веществами, синтезируемыми соматическими клетками.