Ocena podatności białek serwatkowych na działanie zewnątrzkomórkowych proteaz drożdży Yarrowia lipolytica | The evaluation of whey proteins susceptibility to degradation with extracellular proteases isolated from Yarrowia lipolytica

Polish. Do badań wykorzystano zarówno aktywną w środowisku kwaśnym proteazę aspartylową, a także działającą w środowisku alkalicznym proteazę serynową. Hydrolizie poddano alfa-laktoalbuminę, beta-laktoglobulinę oraz dostępny w handlu koncentrat białek serwatkowych (WPC-80). Reakcję hydrolizy prowadzono w temperaturze 37°C, w pH 3,0 (dla proteazy aspartylowej) i w pH 8,0 (dla proteazy serynowej), wprowadzając enzym w dawce 10 U/mg białka substratowego. Postęp proteolizy analizowano ilościowo poprzez oznaczenie stopnia hydrolizy i przyrost wolnych grup aminowych oraz jakościowo, tj. elektroforetycznie, a także wykonując rozdział frakcji białkowo-peptydowych przy wykorzystaniu wysokosprawnej chromatografii cieczowej w układzie odwróconych faz (RP-HPLC). W puli wszystkich przetestowanych wariantów badawczych najwyższy poziom degradacji sięgający 39% uzyskano w roztworach beta-laktoglobuliny trawionych drożdżową protezą serynową.

English. In the research the aspartyl and serine proteases were used for hydrolysis of alpha-lactoalbumin, beta-lactoglobulin and whey protein concentrate (WPC-80). The reaction was carried out at pH 3.0 and pH 8.0 respectively, at 37°C, with the enzyme applied in a dose of 10 U/mg of the protein. The progress of proteolysis was monitored quantitatively by the determination of the hydrolysis degree (DH), free amino groups content and qualitatively by the SDS PAGE electrophoresis and by RP-HPLC. All tested substrates were characterized by low susceptibility to degradation with aspartyl protease, while the application of serine protease caused the intensive degradation mainly beta-lactoglobulin.