The use of glycerol for the cryopreservation of inconnu's sperm | Применение глицерина для криоконсервации спермы белорыбицы

English. There was studied a possibility to use glycerol as a cryoprotectant, instead of dimethylsulfoxide (DMSO) for cryopreservation of sperm of inconnu (Stenodus leucichthys Gueldenstaedtii, 1772). Investigations were carried out from 2015 to 2016 in laboratory conditions. The material was collected at the Alexandrovsky sturgeon breeding farm (the Astrakhan region) in the spawning period. Native sperm of 6 inconnu male was used as control. The semen quality was determined in terms of motility (life time) of sperm cells after its activation by water. As a cryoprotectant there were used: base solution – 80%, sucrose - 1.71 g/l, mannite - 0.98 g/l, yolk – 10%, DMSO – 10% and base solution – 87%, sucrose - 1.71% g/l, mannite - 0.98 g/l, yolk - 10%, glycerol - 3 variants: 3; 5 and 10%. In order to provide the most complete penetration of cryoprotectants into the cells there was used electrostimulation of cell membranes. Equilibration time was 5 and 15 minutes. Thawing semen was performed in a water bath at a temperature of 38-40 deg. C. For removing the protectors from cells there was chosen a saline solution (0.7% NaCl) as an isotonic solution. In tests with DMSO the life activity of sex cells was 2 times lower than in the tests with glycerol: 78 and 186.2 s at the end of equilibration and 52.3 and 128.9 s after thawing. Sperm cells showed maximum activity under a 5% glycerol concentration during equilibration - 15 min. Concentration of glycerol of 3% was insufficient, concentration of 10% was excessive, as it suppressed the activity of sperm cells. Egg yolk which coagulated in combination with glycerol, making difficulty for observing, had to be excluded from the composition of cryoprotectant.

Russian. Исследовалась возможность использования глицерина в качестве криопротектора вместо диметилсульфоксида (ДМСО) для криоконсервации спермы белорыбицы (Stenodus leucichthys Gueldenstaedtii, 1772). Исследования проводились в 2015–2016 гг. в лабораторных условиях. Материал собирали на Александровском осетровом рыбоводном заводе (Астраханская область) в период нерестовой кампании. В качестве контроля использовали нативную сперму белорыбицы от 6 самцов. Качество спермы определяли по двигательной активности (продолжительности жизни) спермиев после активации спермы водой. В качестве криопротектора использовали следующие составы: базовый раствор – 80%, сахароза – 1,71 г/л, маннит – 0,98 г/л, яичный желток – 10%, ДМСО – 10% и базовый раствор – 87%, сахароза – 1,71 г/л, маннит – 0,98 г/л, яичный желток – 10%, глицерин – 3 варианта: 3; 5 и 10%. Для обеспечения наиболее полного проникновения криопротекторов внутрь клеток применяли электростимуляцию их мембран. Время эквилибрации – 5 и 15 мин. Размораживание спермы проводили на водяной бане при температуре 38–40 град. С. Для выведения протекторов из клеток в качестве изотонического раствора был выбран физиологический раствор (0,7%-ный NaCl). В опытах с ДМСО жизнестойкость половых клеток в среднем была почти в 2 раза меньше, чем в опытах с глицерином: 78 и 186,2 с по окончании эквилибрации и 52,3 и 128,9 с после оттаивания. Наибольшую активность спермии проявили при концентрации глицерина 5%, время эквилибрации – 15 мин. Концентрация глицерина 3% недостаточна, концентрация 10% избыточна, т. к. подавляет активность спермиев. Яичный желток, который при сочетании с глицерином коагулирует, создавая сложности при просмотре, из состава криопротектора целесообразно исключить.